狗脾脏中性粒细胞分离液试剂盒说明书

细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。
产品名称  狗脾脏中性粒细胞分离液试剂盒说明书
规格： 2×200ml/KIT
储存条件   2-8℃
单位 盒


1. 悬浮细胞，2000rpm离心5min收集细胞;对于贴壁细胞，要用不含EDTA的胰酶消化细胞，胰酶消化时间不宜过长或过短(过长细胞膜破碎，造成假阳性，过短，细胞黏连影响检测)最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，吸除胰酶消化液，加入细胞培养液终止消化，2000rpm离心5min收集细胞。
2. 4℃预冷PBS，洗涤细胞2次（2000rpm x 5min）,收集细胞2～5×105 。
3. 离心弃上清，加入500μL结合缓冲液，轻轻吹打重悬细胞。
4. 加入5μL Annexin V-FITC，轻轻吹打混匀，加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许，可以在检测前5分钟加入PI)
5. 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。最好在1h内检测。

      狗脾脏中性粒细胞分离液试剂盒说明书尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
      如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
      染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
      如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
      荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
      用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
      需自备PBS。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
2 ug pOTB7 PLK1 pOTB7 PLK1 低温运输，-20℃保存
50T 脊髓延髓肌肉症PCR检测试剂盒  低温运输，-20℃保存
哥伦比亚琼脂培养基（2015药典） Columbia Blood Agar Medium 250g
100µL 小鼠抗mCherry标签单抗 Anti mCherry-Tag Mouse MAb -20℃保存
2 ug pTALEN_v2 (HD) pTALEN_v2 (HD) 低温运输，-20℃保存
营养琼脂培养基 用于细菌总数测定、纯培养及保存菌种，也可用于消毒效果测定；加入脱纤维羊血或兔血，制成血琼脂... 250g
3%NaCl精氨酸双水解酶 英文名称： 产品规格：20支 
500mL Sodium Phosphate Buffer（磷酸钠缓冲液）,0.2M,pH8.0  Sodium Phosphate Buffer,0.2M,pH8.0  常温保存
1000mL Tris Buffered Saline(TBS),10X,pH7.4  Tris Buffered Saline(TBS),10X,pH7.4  常温保存
哥伦比亚培养基 Columbia Medium 250g
10管 穿刺培养基 Stab Medium 4℃保存
5g 牛血红蛋白 Hemoglobin  4℃保存
乳糖发酵培养基 用于多管发酵法测定食品、纯净水和一次性使用卫生用品中大肠菌群的确证试验（中华人民共和国药典... 250
乳糖胆盐发酵培养基（高PH值） 英文名称：Lactose Bile Medium 产品规格：250g 
50mL CM交换介质 CM Medium 常温干燥封袋保存
100mL Potassium Acetate Solution(钾溶液），8M   Potassium Acetate Solution，8M   常温保存
副溶血性弧菌成套生化鉴定管（HRGB）  10种*2套/盒*5盒
狗脾脏中性粒细胞分离液试剂盒说明书Picroside I 胡黄连苷I 409-30-9  20mg
氯己定(标准品) Chlorhexidine 55-56-1 质量规格：分析标准品,99.5%
阿魏酸,松柏酸,反式阿魏酸 Ferulic acid 537-98-4；1135-24-6 质量规格：>99%,合成
阿米替林（标准品） Amitriptyline HCl  549-18-8 质量规格：含量测定
(S)-2-氨基-5-氧基四萘盐  (S)-2-Amino-5-methoxytetralin Hydrochloride 549-17-0 质量规格：>98%
刺五加苷E（标准品） Eleutheroside E 39432-56-9 质量规格：HPLC≥98%，标准品
无水醋酸锌 Zinc acetate 557-34-6 质量规格：AR
格列齐特-d4 Gliclazide-d4 1185039-30-8 质量规格：美国进口
雪上一枝蒿素 Bullatine A 1354-84-3 质量规格：标准品,用于含量测定
3M 乙酸钠(pH=5.2) 1ml  瓶
癸二酸二乙酯(Standard for GC, ≥99.5% (GC)) Diethyl sebacate 110-40-7 质量规格：Standard for GC, ≥99.5% (GC)
D-山梨醇 D-Sorbitol 50-70-4 质量规格：>98%,BR
常春藤皂苷元(标准品) Hederagenin 465-99-6 质量规格：HPLC≥98%，标准品
2,3-Dihydroxybenzoic acid 2,3-二羟基酸 303-38-8  50mg
4-差向-四环素-d6 4-epi-Tetracycline-d6 79-85-6 (unlabeled) 质量规格：美国进口
细胞色素C(牛源) Cytochrome C 97-43-6 质量规格：>95%,BR，来源牛心

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.