猫骨髓单个核细胞分离液试剂盒说明书

细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。
产品名称  猫骨髓单个核细胞分离液试剂盒说明书
规格： 200ml/KIT
储存条件   18-25℃保存，有效期2年。
单位 盒
本品用于分离猫骨髓单个核细胞。
本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启封后置常温保存。如4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。



1. 悬浮细胞，2000rpm离心5min收集细胞;对于贴壁细胞，要用不含EDTA的胰酶消化细胞，胰酶消化时间不宜过长或过短(过长细胞膜破碎，造成假阳性，过短，细胞黏连影响检测)最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，吸除胰酶消化液，加入细胞培养液终止消化，2000rpm离心5min收集细胞。
2. 4℃预冷PBS，洗涤细胞2次（2000rpm x 5min）,收集细胞2～5×105 。
3. 离心弃上清，加入500μL结合缓冲液，轻轻吹打重悬细胞。
4. 加入5μL Annexin V-FITC，轻轻吹打混匀，加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许，可以在检测前5分钟加入PI)
5. 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。最好在1h内检测。

      猫骨髓单个核细胞分离液试剂盒说明书尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
      如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
      染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
      如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
      荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
      用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
      需自备PBS。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
BF839菌计数选择培养基 英文名称：BF839 Bacterium Count Selective Medium 产品规格：250g 
1mL 亮抑蛋白酶肽溶液，10 mg/mL Leupeptin Solution 4℃保存一周，-20℃保存6个月
5g L- 色氨酸 L-Tryptophan 室温干燥保存
霉菌培养基（含琼脂和氯霉素） Fungal Medium 250g
脑心浸出液肉汤BHI 广泛用于霉菌、酵母、细菌的培养，包括营养要求较高的微生物的培养，特别用于食品卫生微生物检验... 100g
100g 柠檬酸 ( 无水 ) Citric Acid(Anhydrous) 室温干燥保存
2 ug pETcoco-2 pETcoco-2 低温运输，-20℃保存
1 管 DH10Bac大肠杆菌 DH10Bac E.coli Strain -80℃保存
1 管 JM105大肠杆菌 JM105 E.coli Strain -80℃保存
25g 甲基 α-D- 吡喃甘露糖苷 Methylα-D-Mannopyarnoside 室温干燥保存
草酸钾兔血浆 Potassium Oxalate In Rabbit Plasma 0.2ml*20
胆硫乳琼脂培养基(DHL) 用于肠道致病菌特别是沙门氏菌和志贺氏菌的选择性分离培养。(《中华人民共和国药典》2010年版) 250g
Half–Fraser培养基 英文名称：Half-Fraser Medium 产品规格：250g 
2 ug pCGPV pCGPV 低温运输，-20℃保存
250mL Carbonate Buffer（碳酸盐缓冲液）,0.5M,pH10  Carbonate Buffer,0.5M,pH10  常温保存
100次 植物种属鉴定PCR Mix 1（细胞核ITS） Plant DNA Barcoding PCR Mix -20℃保存
5g 胞嘧啶 Cytosine 室温保存
猫骨髓单个核细胞分离液试剂盒说明书改良台氏液 5ml  瓶
Dimethyl phthalate 邻二酸二酯 131-11-3  20mg
无水锰(>98%,BR) Manganese (II )sulfate anhydrous 7785-87-7 质量规格：>98%,BR
DMSO 二亚砜(细胞培养级) 50ml  瓶
比伐卢定(TFA) Bivalirudin TFA 1280-0 质量规格：纯度大于98%
玫红酸(AR) Rosolic acid 603-45-2 质量规格：AR
Dextran 右旋糖酐50 10g  瓶
(2S,3R,5S)-5-[(N-酰-L-亮氨酰)氧]-2-己基-3-羟基十六烷酸(奥利司他杂质) (2S,3R,5S)-5-[(N-Formyl-L-leucyl)oxy]-2-hexyl-3-hydroxyhexadecanoic Acid (Orlistat Impurity) 130793-28-1 质量规格：美国进口
亚培南（标准品） Imipenem monohydrate 74431-23-5 质量规格：HPLC>98%,标准品
咽侧体抑制素Ⅳ Allatostatin IV 123338-13-6 质量规格：>95%,BR
酸性红 73（标准品） Acid Red 73 5413--2 质量规格：检查
大黄素-8-β-D-吡喃葡萄糖苷（标准品） Emodin-8-glucoside 23313--5 质量规格：HPLC≥98%，标准品
康唑（标准品） Fluconazole 86386-73-4 质量规格：HPLC>98%,标准品
Jujuboside B 酸枣仁皂苷B 554-05-2  20mg
二十四烷酸酯（标准品） Methyl tetracosanoate 2442-49-1 质量规格：分析标准品
二巯基马来腈二钠(>90.0%(N)) Disodium Dimercaptomaleonitrile 54-54-6 质量规格：>90.0%(N)

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.