大鼠外周血单核细胞分离液试剂盒说明书

细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。
产品名称  大鼠外周血单核细胞分离液试剂盒说明书
规格： 200ml/KIT
储存条件   RT，避光，有效期2年
单位 盒



1. 悬浮细胞，2000rpm离心5min收集细胞;对于贴壁细胞，要用不含EDTA的胰酶消化细胞，胰酶消化时间不宜过长或过短(过长细胞膜破碎，造成假阳性，过短，细胞黏连影响检测)最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，吸除胰酶消化液，加入细胞培养液终止消化，2000rpm离心5min收集细胞。
2. 4℃预冷PBS，洗涤细胞2次（2000rpm x 5min）,收集细胞2～5×105 。
3. 离心弃上清，加入500μL结合缓冲液，轻轻吹打重悬细胞。
4. 加入5μL Annexin V-FITC，轻轻吹打混匀，加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许，可以在检测前5分钟加入PI)
5. 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。最好在1h内检测。

      大鼠外周血单核细胞分离液试剂盒说明书尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
      如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
      染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
      如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
      荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
      用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
      需自备PBS。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
过灭菌芽孢条 用于监视蒸汽的自含式生物指示剂 100支/盒
葡萄糖发酵管(军团菌) 英文名称： 产品规格：20支 
2 ug pDONR/Zeo pDONR/Zeo 低温运输，-20℃保存
100mL HEPES Buffer,0.5M,pH6.5  HEPES Buffer,0.5M,pH6.5  常温保存
乳糖莫能霉素葡萄糖醛酸琼脂 LMG Agar 250g
1g L- 谷胱甘肽 ( 型 ) L-Glutathione (Oxidized ) 4℃保存
2 ug pFLD1 Z+ pFLD1 Z+ 低温运输，-20℃保存
PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 用于药品，生物制品的样品稀释。（《中华人民共和国药典》2010年版） 250g
马尿酸钠培养基 英文名称： 产品规格：250g 
1.5mL 高GC DNA清除剂，PCR级 High GC DNA Erasol 常温
500mL Acrylamide: Bis-acrylamide Solution（丙烯-甲叉双丙烯溶液），39:1   Acrylamide: Bis-acrylamide Solution，39:1   常温保存
TCBS琼脂平板（9cm） Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose Agar 10个/包
250g α- 淀粉酶 AMY (α-Amylase) 4℃保存
2 ug pDsRed-Monomer-Golgi pDsRed-Monomer-Golgi 低温运输，-20℃保存
250mL HEPES Lysis Buffer with NP-40  HEPES Lysis Buffer with NP-40  常温保存
甘露高盐琼脂 英文名称：Mannitol Salt Agar 产品规格：250g 
30次 一站式miRNA尿素-PAGE电泳套装 One-Stop miRNA Urea-PAGE Pack 4℃保存
大鼠外周血单核细胞分离液试剂盒说明书三甘醇二乙酸酯(>98.0%(GC)) Triethylene Glycol Diacetate 111--7 质量规格：>98.0%(GC)
度洛西汀(标准品) Duloxetine hcl 136434-34-9 质量规格：HPLC>98%,标准品
Mangiferin 芒果苷 4773-96-0  20mg
5ml吸头盒 28孔  个
苏木素规染色液 5ml  瓶
舒必利(标准品) Levosulpiride 23672-07-3 质量规格：>98%,标准品
Vinorelbine 长春瑞滨 71486-22-1  20mg
(R)-N-去乙基奥昔布宁盐 (R)-N-Desethyl Oxybutynin Hydrochloride 181647-12-1 质量规格：美国进口
Carbenicillin disodium 羧苄西林钠 4894-6  1mg
磁力搅拌子 10mm  只
Asarinin 细辛脂素 133-04-0  20mg
醋酸锰四水 Manganese (II) acetate, tetrahydrate 6156-78-1 质量规格：>98%,BC
GC-(-)-gallocatechin 没食子儿茶素 3371--5  20mg
Metaphosphoric acid 偏磷酸 1g  瓶
根皮素(标准品) Phloretin 60-82-2 质量规格：HPLC≥98%，标准品
茶黄素-3'-没食子酸酯 Theaflavin-3'-gallate 28543-07-9 质量规格：HPLC≥95%，标准品

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.