线粒体提取试剂盒说明书

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.

细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。
产品名称  线粒体提取试剂盒说明书
规格： 50T
英文名称 mitochondrialextractionkit
储存条件   四周内使用可4℃储存，长期保存请置于-20℃。
单位盒
产品简介：
线粒体提取试剂盒用于从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的线粒体。适合于动物软组织（肝或脑组织）和硬组织（肌肉）以及培养细胞的线粒体的制备。其制备物产量高，可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。



1. 悬浮细胞，2000rpm离心5min收集细胞;对于贴壁细胞，要用不含EDTA的胰酶消化细胞，胰酶消化时间不宜过长或过短(过长细胞膜破碎，造成假阳性，过短，细胞黏连影响检测)最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，吸除胰酶消化液，加入细胞培养液终止消化，2000rpm离心5min收集细胞。
2. 4℃预冷PBS，洗涤细胞2次（2000rpm x 5min）,收集细胞2～5×105 。
3. 离心弃上清，加入500μL结合缓冲液，轻轻吹打重悬细胞。
4. 加入5μL Annexin V-FITC，轻轻吹打混匀，加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许，可以在检测前5分钟加入PI)
5. 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。最好在1h内检测。

      线粒体提取试剂盒说明书尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
      如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
      染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
      如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
      荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
      用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
      需自备PBS。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
10mg Denatured Calf Thymus DNA Solution Denatured Calf Thymus DNA Solution 常温保存
SOB培养基 SOB Medium 250g
50次 一步法质粒 DNAout 2.0 One-Step Plasmid DNAOUT 2.0 常温保存(溶液A需4℃保存)
2 ug pET-43.1a(+) pET-43.1a(+) 低温运输，-20℃保存
250mL MOPS Buffer,1.0M,pH7.4   MOPS Buffer,1.0M,pH7.4   常温保存
改良沙氏琼脂培养基 英文名称：Sabouraud's Agar，Modified 产品规格：250g 
5次 填入法DNA末端标记试剂盒C Fill-in DNA End Labeling Kit -20℃保存
2 ug STOP-eGFP-ROSA26TV STOP-eGFP-ROSA26TV 低温运输，-20℃保存
Fraser培养基颗粒 Fraser Medium 300ml/袋*10
N6培养基 N6 Medium 250g
2 ug pCMV-SPORT6 PPP2R3A pCMV-SPORT6 PPP2R3A 低温运输，-20℃保存
250mL EDTA Solution（EDTA溶液）,17%,pH7.0  EDTA Solution,17%,pH7.0  常温保存
胰蛋白胨大豆琼脂 英文名称： 产品规格：5kg/袋 
32次 终点显色法内毒素定量试剂盒 Chromogenic End-point TAL Kit  4℃避光保存
1套 克必隆eTS PCR产物差减杂交试剂盒  
50T 炭疽杆菌PCR检测试剂盒  低温运输，-20℃保存
一次性卫生用品检验检验培养基  
线粒体提取试剂盒说明书N-乙酰磺恶唑 N-Acetyl Sulfamethoxazole 312-10-7 质量规格：美国进口
四丙基化铵(>98.0%(T)) Tetrapropylammonium Iodide 631-40-3 质量规格：>98.0%(T)
氘代DMSO-D6(50 g ) Dimethyl Sulfoxide-D6 2206--1 质量规格：D,99.8%+TMS 0.03%
丁烯基酞（标准品） 3-Butylidenephthalide 551-08-6 质量规格：HPLC≥98%，标准品川芎提取,液体
原儿茶,3,4-二羟基 3,4-Dihydroxybenzaldehyde 139-85-5 质量规格：≥98%
4,4'-二氯二砜(>98.0%(GC)) 4,4'-Dichlorodiphenyl Sulfone 29411 质量规格：>98.0%(GC)
液相RNase清除剂 1.5ml  支
6-去氧喷昔洛韦 6-Deoxypenciclovir 1042-86-3 质量规格：美国进口
磁力搅拌子 35mm  只
1,4-Diaminobutane 腐 110-1  20mg
6-氯嘌呤(>98%,BR) 6-Chloropurine 87-42-3 质量规格：>98%,BR
帕唑帕尼盐 Pazopanib HCl 635702-64-6 质量规格：>99%,BR,可用于细胞培养 
2, 6-二氯醌-4-氯亚(>98%,BR) 2,6-Dichloroquinone-4-chlorimide 101-38-2 质量规格：>98%,BR
头孢噻呋(标准品) Ceftiofur hydrochloride 103980-44-5 质量规格：含量测定
二胍（标准品） Diphenyl guanidine 102-06-7 质量规格：分析标准品(for titrimetry),≥99.5%(HPLC)
3-α-羟基普伐他汀内酯 3α-Hydroxy Pravastatin Lactone 85798-96-5 质量规格：美国进口