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- 2026年03月27日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
Cytiva
- 规格：
1X1 ML/5X1 ML/5X5 ML/100X1 ML/100X5 ML
| 规格： | 1X1 ML | 产品价格： | 询价 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 5X1 ML | 产品价格： | 询价 |
| 规格： | 5X5 ML | 产品价格： | 询价 |
| 规格： | 100X1 ML | 产品价格： | 询价 |
| 规格： | 100X5 ML | 产品价格： | 询价 |
概述
HisTrap FF Crude 层析柱是具有高结合载量的 IMAC 层析柱，用于纯化带 his 标签的蛋白，可满足工艺放大需求。
- 高结合载量——结合量高达 40 mg his-tag 蛋白/mL 层析填料。
- 出色的流速特性——即使在高流速下也能实现出色性能。
- 针对未澄清样品进行了优化——较短的纯化时间可以最大限度地减少潜在的负面影响，例如蛋白降解和氧化。
- HiTrap 层析柱规格——与注射器、泵或层析系统（例如 ÄKTA 系统或其他 FPLC 系统）相容。
从未澄清的裂解物中纯化带 his 标签的蛋白
HisTrap FF crude 是一种预装式即用型色谱柱，其中预装有 Ni Sepharose 6 Fast Flow 填料。彻底破碎细胞后，无需经过预先离心和过滤即可将未澄清的裂解物加载到层析柱上。
如果您计划加载未澄清的样品，则务必要确保裂解物尽可能地完整。建议您添加溶菌酶和 DNase I，然后在高于常规水平的时长内进行机械裂解（例如通过超声处理）。
IMAC 层析柱使用技巧和注意事项
您是否希望最大限度地提高层析柱的性能？ 请观看 Cytiva 的 HisTrap FF Crude 层析柱视频，了解相关注意事项和建议。
成功用于已发表研究
这些层析柱用途广泛，包括：
- 来自未澄清大肠杆菌裂解物的带有 his 标签的铁蛋白的纯化
- 未磷酸化人类核糖体蛋白的纯化
- 重组蛋白纯化以研究抗生素 NXL101 的作用机理
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文献和实验设计应遵循以下两点： 在C-端加入标签 使用长标签或者引入一段linker 由于膜蛋白 N 端信号肽的存在，标签只能加在 C 端。8—10 个组氨酸标签能够提高膜蛋白的结合强度，进而提高收率。 有时可以采取快速的方法进行第一步亲和层析。在细胞破碎阶段，直接加入去垢剂来溶解膜蛋白（不需要提前分离细胞膜），通过此法得到的上清可直接用 HisTrap FF crude 预装柱进行纯化，缩短实验时间。 分子筛 vS 离子交换 亲和层析之后，往往使用分子筛做最后的精纯，但如果杂质依然很多或者膜蛋白
酶切位点。 标签设计应遵循以下两点： 在 C-端加入标签 使用长标签或者引入一段 linker 由于膜蛋白 N 端信号肽的存在，标签只能加在 C 端。8-10 个组氨酸标签能够提高膜蛋白的结合强度，进而提高收率。 有时可以采取快速的方法进行第一步亲和层析。在细胞破碎阶段，直接加入去垢剂来溶解膜蛋白（不需要提前分离细胞膜），通过此法得到的上清可直接用 HisTrap FF crude 预装柱进行纯化，缩短实验时间。 分子筛 vs 离子
Chelating Sepharose FF螯合Ni2+金属，在一般或变性条件（8M尿素）下透过组氨酸螯合融合蛋白。HisTrap试剂盒提供整套His-Tag蛋白的纯化方法。 9.纯化------包涵体蛋白 包涵体蛋白往往需溶于6M盐酸胍或8M尿素中。高化学稳定性的Superose 12及Sepharose 6FF凝胶过滤介质很适合在变性条件下做纯化。变性纯化后的蛋白需要复性至蛋白的天然构象。Superdex 75、Q Sepharose FF和Phenyl Sepharose FF分别被发现
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