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- 2025年12月09日
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- 供应商：
Cytiva
- 规格：
5X1ML/5X5ML
| 规格： | 5X1ML | 产品价格： | 询价 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 5X5ML | 产品价格： | 询价 |
概述
HisTrap FF 是一种预装式即用型层析柱，预装有 Ni Sepharose 6 Fast Flow 填料，可通过螯和金属离子亲和层析 (IMAC) 来对带组氨酸标签的重组蛋白质进行制备纯化。
- 高结合载量，约 40 mg/mL 层析填料。
- Ni2+ 的脱落可忽略不计。
- 预装柱可为组氨酸标记的重组蛋白质提供可靠，方便的省时纯化。
- 耐受各种还原剂、去污剂、变性剂和其他添加剂。
Ni Sepharose 6 Fast Flow 由其上固定有螯合配基的 90 µm 高度交联琼脂糖基架组成。该螯合配基上带有 Ni2+ 离子，是纯化大多数带组氨酸标签的蛋白质的金属离子。基质的 Ni2+ 离子脱落可忽略不计，因此可确保在重复 IMAC 纯化中可靠地捕获带组氨酸标签的蛋白质。
Ni Sepharose 6 Fast Flow 基质可以实现高流速，使 HisTrap FF 层析柱非常适合于小规模的工艺放大。可以将层析柱串行连接，以提高载量。
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文献和实验设计应遵循以下两点： 在C-端加入标签 使用长标签或者引入一段linker 由于膜蛋白 N 端信号肽的存在，标签只能加在 C 端。8—10 个组氨酸标签能够提高膜蛋白的结合强度，进而提高收率。 有时可以采取快速的方法进行第一步亲和层析。在细胞破碎阶段，直接加入去垢剂来溶解膜蛋白（不需要提前分离细胞膜），通过此法得到的上清可直接用 HisTrap FF crude 预装柱进行纯化，缩短实验时间。 分子筛 vS 离子交换 亲和层析之后，往往使用分子筛做最后的精纯，但如果杂质依然很多或者膜蛋白
酶切位点。 标签设计应遵循以下两点： 在 C-端加入标签 使用长标签或者引入一段 linker 由于膜蛋白 N 端信号肽的存在，标签只能加在 C 端。8-10 个组氨酸标签能够提高膜蛋白的结合强度，进而提高收率。 有时可以采取快速的方法进行第一步亲和层析。在细胞破碎阶段，直接加入去垢剂来溶解膜蛋白（不需要提前分离细胞膜），通过此法得到的上清可直接用 HisTrap FF crude 预装柱进行纯化，缩短实验时间。 分子筛 vs 离子
。为获得更高纯度，常规思路是使用分子筛或离子交换进行进一步纯化。除了应用不同层析策略外，我们还可以从标签设计入手，引入一个新标签以构建双标签蛋白，从而增加目的蛋白的特异性。 下图展示的是 E.coli 表达的双标签蛋白 StrepⅡ-六组氨酸-蛋白（相对分子量：约 15400）使用两步亲和层析进行纯化。首先使用 HisTrap HP 进行固定金属亲和层析（IMAC），再使用 Strep Trap HP 进一步亲和纯化。SDS-PAGE 结果清楚地论证了双标签法对获得高纯度蛋白的优势。 双
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