Porcine TNF-α ELISA Kit

碧云天的Porcine TNF-α ELISA Kit (Porcine Tumor Necrosis Factor αEnzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即猪肿瘤坏死因子α酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测猪血清、血浆或细胞培养上清液中的TNF-α的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为26.8pg/ml，与小鼠、大鼠TNF-α以及人的TNF-β等均没有交叉反应，与人的TNF-α有6.3%的交叉反应性。板内、板间变异系数均小于10%。
肿瘤坏死因子α (Tumor Necrosis Factor, TNF-α)，又称cathectin或TNFSF1A，属于TNF配体家族成员。TNF-α与TNF-β能够与相同的细胞表面受体结合，并且具有部分相同的生物学功能。TNF-α能够抑制部分肿瘤的生长，在正常的抗感染过程中也具有重要作用，是重要的免疫调节因子和炎症反应应答调节因子。在感染性休克和自身免疫疾病等病理条件下，TNF-α的表达会出现明显升高。TNF-α主要由活化的巨噬细胞、自然杀伤细胞、角质细胞、血管平滑肌细胞产生分泌。
猪TNF-α基因编码得到含有232个氨基酸残基的II型跨膜糖蛋白，其中包含35个氨基酸的胞质域、21个氨基酸的跨膜域和178个氨基酸的胞外域。在TNF-α转化酶的作用下还能够得到156个氨基酸残基的游离TNF-α。具有生物学活性的TNF-α通常以三聚体的形式存在。猪TNF-α与人和小鼠TNF-α具有89%和79%的氨基酸同源性。
TNF具有两种受体：I型受体(type B, p55, TNFRSF1A)和II型受体(type A, p75, TNFRSF1B)，两种受体与TNF-α和TNF-β具有相同的亲和力。两种受体胞外域具有氨基酸序列同源性，而胞质域则并不相同，这提示两种受体在与配体结合后可能介导不同的信号传递通路。TNF-α以三聚体形式与相应受体结合，进而引发其下游信号通路的激活，TNF-α的信号通路图参见图1。

图1. TNF-α的信号通路示意图。

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中猪TNF-α的浓度，其原理见图2。猪TNF-α特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的猪TNF-α会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗猪TNF-α抗体后，生物素化抗猪TNF-α抗体与猪TNF-α结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。猪TNF-α浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中猪TNF-α浓度。

图2. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
PT520-1	猪TNF-α抗体预包被板	8孔×12条
PT520-2	样品分析缓冲液	5ml
PT520-3	标准品稀释液	10ml
PT520-4	猪TNF-α标准品	2-4瓶
PT520-5	猪TNF-α生物素化抗体	10ml
PT520-6	辣根过氧化物酶标记Streptavidin	10ml
PT520-7	洗涤液(20X)	30ml
PT520-8	TMB溶液	10ml
PT520-9	终止液	5ml
PT520-10	封板膜(透明)	2张
PT520-11	封板膜(白色)	2张
-	说明书	1份

保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组份4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组份严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
更多产品简介及说明书见碧云天官网：https://www.beyotime.com/index.htm