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Rat MCP-1 ELISA
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碧云天的Rat CCL2/JE/MCP-1 ELISA Kit (Rat Monocyte Chemoattractant Protein1 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit),即大鼠单核细胞趋化蛋白1酶联免疫吸附检测试剂盒,是一种用于特异性地高灵敏地定量检测大鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的MCP-1的ELISA试剂盒。本产品检测灵敏度高,特异性强,重复性好。多次重复检测结果表明,最小检出量为8.9pg/ml,与大鼠的CCL3/MIP-1α、G-CSF、GM-CSF、IFN-γ、IL-1α、IL-1β等均没有交叉反应,与小鼠的MCP-1有33%的交叉反应性,板内、板间变异系数均小于10%。单核细胞趋化蛋白(Monocyte Chemoattractant Protein 1, MCP-1),也被称为单核细胞趋化与激活因子(Monocyte Chemotactic and Activating Factor, MCAF),属于趋化因子家族CC亚族的一个成员。大鼠MCP-1 cDNA编码产生99个氨基酸的前体蛋白,经剪切掉23个氨基酸的信号肽后得到成熟的大鼠MCP-1。除了成纤维细胞、星形胶质细胞细胞和上皮细胞外,大鼠MCP-1在单核细胞、巨噬细胞、肥大细胞、T细胞、内皮细胞、成骨细胞和成釉质细胞上也有所表达。MCP-1的表达主要受到炎性刺激因子和TNF-α、IL-1、IFN-γ和PDGF等细胞因子的影响。多项动物实验表明MCP-1在炎症过程中具有重要作用。抑制MCP-1的活性,能够减少实验动物内毒素血症、延迟性过敏反应和炎症性关节炎的发生,当MCP-1过度表达时会增强淋巴细胞和单核细胞的招募。部分研究结果还表明MCP-1缺陷的小鼠在肺部感染、中风、血管损伤、肾小管损伤、自身免疫疾病、眼色素层炎和伤口恢复时期会表现出对炎性相关巨噬细胞、单核细胞、NK细胞和γδT细胞的抑制。人体中MCP-1水平的升高通常都伴随着败血症、节段性回肠炎、狼疮性肾炎、肌萎缩性脊髓侧所硬化症、风湿、急性胰腺炎和动脉粥样硬化等疾病。在胃癌、食管鳞状细胞癌、恶性胶质瘤、卵巢癌、胰腺癌、膀胱癌和乳腺癌中,MCP-1的表达也会有所升高。MCP-1与受体结合后能够通过活化Smad3和p42/44 MAPL及PI3K/AKT通路影响肿瘤细胞的迁移和存活,还能够影响ERK1/ERK2/JNK-AP1和NF-κB信号通路发挥作用。本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中大鼠MCP-1的浓度,其原理见图1。大鼠MCP-1特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上,当加入标准品或样品时,其中的大鼠MCP-1会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗大鼠MCP-1抗体后,生物素化抗大鼠MCP-1抗体与大鼠MCP-1结合,形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin(HRP-Streptavidin),由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合,因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液,固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质,在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。大鼠MCP-1浓度与A450值呈正比,通过绘制标准曲线,对照样品吸光度值,即可计算出样品中大鼠MCP-1浓度。
图1. 双抗体夹心ELISA原理图。
一个包装的本试剂盒,包括标准品检测,可以进行96次检测。包装清单:
保存条件:标准品4℃保存,1-2周内有效,-20℃保存6个月内有效;试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外,试剂盒其它组分严禁冻存。注意事项:由于标准品一般是冻干粉,在制备后需要严格校准,所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。洗涤液(20X)在低温下可能有结晶,如果发现有结晶,请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。为保证标准品的精确性,标准品配制使用后,如果有剩余请勿再次使用。TMB溶液请勿接触氧化剂和金属,否则容易失效。加样时,请注意每个样品或标准品必须更换枪头,一方面避免交叉污染,另一方面也避免吸取体积的误差。由于本试剂盒均经过独立测试,所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分,即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时,请独立使用各个试剂盒中的试剂,请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。充分混匀对保证反应结果的精准性很重要,在加液后请轻轻晃动整个96孔板,以保证混匀。本试剂盒很多操作在室温进行,要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。洗涤过程非常重要,洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。检测标准品和样品时建议设置重复孔,以确保检测结果的可信度。加样过程中须避免气泡的产生。本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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