TNF-α被诱导分泌后,其同源三聚体与受体TNFR1(TNF receptor, type I)或TNFR2(TNF receptor, type II)结合而引发其下游信号通路的一系列反应。TNF-α的信号通路参见图1。TNFR1在大多数组织中有表达,而TNFR2主要在免疫细胞中表达。TNF-α的跨膜同源三聚体和可溶性同源三聚体都可以完全激活TNFR1,而TNFR2仅对TNF-α的跨膜同源三聚体产生响应。 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中靶蛋白的的浓度,其原理见图2。靶蛋白特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上,当加入标准品或样品时,其中的靶蛋白会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗靶蛋白抗体后,生物素化抗靶蛋白抗体与靶蛋白结合,形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin(HRP-Streptavidin),由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合,因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液,固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质,在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。靶蛋白浓度与A450值呈正比,通过绘制标准曲线,对照样品吸光度值,即可计算出样品中靶蛋白浓度。