Mouse IL-17A ELISA Kit

碧云天的Mouse IL-17A ELISA Kit (Mouse Interleukin-17A Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠白细胞介素17A酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的IL-17A的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为13.6pg/ml，与人IFN-γ和大鼠IFN-γ等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
小鼠白细胞介素17(Interleukin 17, IL-17)，又称IL-17A或CTLA-8，是一种分子量在21kDa的糖基化多肽，属于IL-17细胞因子家族。成熟的小鼠IL-17A是由158个氨基酸的前体蛋白剪切掉25个氨基酸信号肽后剩余的133个氨基酸片段组成。在人和小鼠的IL-17A分子中都具有一个保守的N连接糖基化位点。IL-17A能够形成分子量在35-38kDa的同源二聚体或与IL-17形成分子量在45-58kDa的异源二聚体。成熟的小鼠IL-17A分别与人IL-17和大鼠IL-17A具有61%和89%的氨基酸同源性。能够产生IL-17的细胞类型主要有CD4+ Th17 T细胞、潘氏细胞、GR1+CD11b+骨髓抑制细胞、CD27-γδT细胞等。
IL-17A的高亲和力受体是由IL-17 RA和IL-17 RC按2:1所组成的异源多聚体。IL-17 RA是一种分子量在130kDa的Ⅰ型跨膜糖蛋白，与其他细胞因子受体、TNF受体或免疫球蛋白受体家族不存在相似性。IL-17 RC也是一种Ⅰ型跨膜糖蛋白，其分子量在90-95kDa之间，与IL-17 RA具有30%的氨基酸同源性。IL-17A和IL-17A/F都能与该受体复合物结合，发挥功能。
IL-17A主要参与中性粒细胞的募集，调控细胞存活。当树突状细胞受到刺激后会分泌IL-23，随后IL-23会刺激T细胞产生IL-17A。IL-17A分泌后，诱导基质/成纤维细胞表达粒细胞集落刺激因子(Granulocyte Colony-Stimulating Factor, G-CSF)和干细胞因子(Stem Cell Factor, SCF)，进而促进中性粒细胞分化和激活。IL-17还能够通过直接抑制中性粒细胞凋亡增加中性粒细胞数量。IL-17A能够刺激巨噬细胞产生TNF-α、IL-1β和IL-6，TNF-α和IL-1β又能刺激内皮细胞产生G-CSF，从而促进中性粒细胞扩增。此外，在滑膜关节，IL-17A还能上调骨细胞NF-κB受体激活蛋白配体的表达，促进破骨细胞生成，促进骨质吸收。
IL-17A与受体结合后，通过NF-κB、C/EBPβ、C/EBPδ和MAPK信号通路，诱导成纤维细胞产生IL-6、IL-8、ICAM-1和G-CSG等细胞因子
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中小鼠IL-17A的浓度，其原理见图1。小鼠IL-17A特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的小鼠IL-17A会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗小鼠IL-17A抗体后，生物素化抗小鼠IL-17A抗体与小鼠IL-17A结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。小鼠IL-17A浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中小鼠IL-17A浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
PI545-1	小鼠IL-17A抗体预包被板	8孔×12条
PI545-2	样品分析缓冲液	5ml
PI545-3	标准品稀释液	10ml
PI545-4	小鼠IL-17A标准品	2-4瓶
PI545-5	小鼠IL-17A生物素化抗体	10ml
PI545-6	辣根过氧化物酶标记Streptavidin	10ml
PI545-7	洗涤液(20X)	30ml
PI545-8	TMB溶液	10ml
PI545-9	终止液	5ml
PI545-10	封板膜(透明)	2张
PI545-11	封板膜(白色)	2张
-	说明书	1份

 

保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。