Human apoE ELISA Kit

碧云天的Human ApoE ELISA Kit (Human Apolipoprotein E Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人载脂蛋白E酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的ApoE的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为79.6pg/ml，与人ApoA1、ApoA2、ApoB、ApoB100、ApoC1、ApoC2、ApoD等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
载脂蛋白E (Apolipoprotein E)是血液中低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白、高密度脂蛋白和乳糜颗粒中重要的蛋白组成部分，在淀粉样蛋白代谢和阿尔茨海默病发展中具有重要作用。ApoE主要由肝细胞、巨噬细胞和中枢神经系统中的非神经元细胞产生。ApoE能够将甘油三酯和胆固醇运送至周围组织中用于细胞吸收和分解代谢，并且能够将高密度脂蛋白和乳糜微粒反向运输至肝脏中。成熟的人ApoE分子量为34kDa，由4个捆·绑的α螺旋结构N端、铰链区和延伸的α螺旋C端组成。由于ApoE结构灵活且具有良好的亲脂亲水特性，多种脂蛋白都能够与ApoE进行结合。ApoE以单体形式与脂蛋白结合，其余情况下则以低聚物的形式存在。成熟的人ApoE与小鼠和大鼠ApoE具有71%的序列相似性。
许多低密度脂蛋白受体都会优先与脂蛋白结合形式的ApoE结合，并促使其发生内化。极低密度脂蛋白受体与未结合脂蛋白的ApoE也能够结合，并促使其内化。脂蛋白的吸收主要受到ApoE与细胞表面硫酸乙酰肝素蛋白多糖(Heparan Sulfate Proteoglycan, HSPG)结合的帮助。ApoE的N端和C端分别介导ApoE与受体、HSPG的结合以及和脂蛋白的相互作用。细胞内高浓度的甾醇物质能够激活核激素受体LXR，从而增加ApoE的合成和甾醇外排。ApoE能够抑制TNF-α、TLR3和TLR4介导的炎症反应，促进Treg细胞和M2型巨噬细胞发展。
      本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人ApoE的浓度，其原理见图1。人ApoE特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人ApoE会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人ApoE抗体后，生物素化抗人ApoE抗体与人ApoE结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人ApoE浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中人ApoE浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
PA030-1	人ApoE抗体预包被板	8孔×12条
PA030-2	标准品稀释液(5X)	20ml
PA030-3	人ApoE标准品	2-4瓶
PA030-4	人ApoE生物素化抗体	10ml
PA030-5	辣根过氧化物酶标记Streptavidin	10ml
PA030-6	洗涤液(20X)	30ml
PA030-7	TMB溶液	10ml
PA030-8	终止液	5ml
PA030-9	封板膜(透明)	2张
PA030-10	封板膜(白色)	2张
-	说明书	1份

保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。