Human ALCAM ELISA Kit

碧云天的Human ALCAM ELISA Kit (Human Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule Enzyme-Linked 
ImmunoSorbent Assay Kit)，即人白细胞活化粘附因子酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的ALCAM的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为37pg/ml，与人E-Selectin、ICAM-2、ICAM-3、P-Selectin、小鼠ALCAM等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
白细胞活化粘附因子(Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule, ALCAM)是一种分子量为110kDa的细胞表面糖蛋白，属于免疫球蛋白家族，能够形成同型黏连或与其它细胞表面的CD6分子相互作用。ALCAM在多种细胞表面都有表达，例如上皮细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、成纤维细胞、神经元细胞、肝细胞和髓系细胞等。ALCAM参与多种粘附和迁移过程，包括轴突导向、淋巴细胞归巢和癌细胞迁移，还能诱导淋巴细胞穿过血脑屏障到达中枢神经系统。另外，ALCAM在鸟类胚胎造血祖细胞形成过程中对髓系细胞集落形成具有重要作用，对小鼠胚胎造血功能形成也具有一定影响。ALCAM与CD6的相互作用对树突状细胞介导的T细胞激活至关重要，ALCAM的表达情况还会影响到巨核细胞的分化情况。
      在多种恶性肿瘤中ALCAM的表达会出现异常，例如黑色素瘤、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、急性髓系白血病和结肠癌。ALCAM的胞外域能够在去整合素金属蛋白酶的作用下发生脱落，离子霉素、PMA和表皮生长因子都能诱导ALCAM胞外域的脱落发生。胞外域的脱落会使得蛋白的功能发生一定的改变，游离的胞外域会以拮抗剂的身份出现，减弱细胞间的粘附作用，从而促进肿瘤的转移。
      本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人ALCAM的浓度，其原理见图1。人ALCAM特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人ALCAM会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人ALCAM抗体后，生物素化抗人ALCAM抗体与人ALCAM结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人ALCAM浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中人ALCAM浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

;一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
PA015-1	人ALCAM抗体预包被板	8孔×12条
PA015-2	标准品稀释液(5X)	10ml
PA015-3	人ALCAM标准品	2-4瓶
PA015-4	人ALCAM生物素化抗体	10ml
PA015-5	辣根过氧化物酶标记Streptavidin	10ml
PA015-6	洗涤液(20X)	30ml
PA015-7	TMB溶液	10ml
PA015-8	终止液	5ml
PA015-9	封板膜(透明)	2张
PA015-10	封板膜(白色)	2张
-	说明书	1份

保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。