- ¥2490
- 泽叶生物
- ZY-16-99151
- 中国/美国/德国/日本
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
20
- 英文名：
Thallus laminariae
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海泽叶生物科技有限公司
- 保存条件：
负20度
Thallus laminariae
产品及特点：
本产品是昆布LAMP鉴定试剂盒，可以用LAMP等温扩增，LAMP 即Loop-Mediated Isothermal Amplification（环介导等温扩增），是2000年才出现的一种新颖的等温核酸扩增方法。它利用 4 条模板专一的特异引物和具有链置换能力的DNA聚合酶，在等温条件下(63℃左右) 30－60 分钟完成扩增。
该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于 PCR 技术，同时还不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程，不依赖任何专门的仪器设备。目前已成功应用于人类及动植物、细菌、病毒、寄生虫、真菌等病原体的快速检测。
| 产品名称 | 方法 | 规格 | 价格 |
| 昆布LAMP鉴定试剂盒 | LAMP | 50次 | 2490元 |
| 昆布PCR鉴定试剂盒 | PCR | 50次 | 1490元 |
| 昆布染料法PCR鉴定试剂盒 | 染料法 | 50次 | 2490元 |
| 昆布探针法PCR鉴定试剂盒 | 探针法 | 50次 | 3490元 |
1. 即开即用的2×LAMP MagicMix，A型含有红色电泳示踪剂，扩增后可以直接上样，不需要上样液。
2. 高特异性，由于同时使用4-6条特异引物，所以特异性比PCR 更高。
3. 高扩增效率，扩增效率可达到10E9-10E10，比PCR灵敏一个数量级，可检测到单拷贝的DNA分子。
4. 65℃左右等温扩增，可以不需要贵重的热循环仪。
5. 即开即用，包含了除引物和模板DNA外的所有成份，十分方便。
6. 肉眼检测扩增结果，不需要昂贵的电泳、荧光PCR等仪器。
7. 本试剂盒足够50次20μL体系的LAMP扩增。
8. 提供扩增对照，便于在遇到困难时分析原因。
9. 本产品只能用于科研，不能用于临床。
LAMP可视化试剂盒操作步骤：
规格及成分
注：本产品 A 型（100203A）中加入了专用示踪染料。
| 成份 | 编号 | 热封袋包装 |
| 2×LAMP MagicMix，含示踪染料 | A | 500 μL（绿色盖） |
| LAMP 阳性对照模板-引物混合物 | B | 45 μL（黄色盖） |
| 使用手册 | C | 1份 |
| 成份 | 编号 | 热封袋包装 |
| 2×LAMP MagicMix，不含示踪染料 | A | 500 μL（绿色盖） |
| LAMP 阳性对照模板-引物混合物 | B | 45 μL（黄色盖） |
| 使用手册 | C | 1份 |
自备试剂 ：LAMP 模板、LAMP 引物、自备可见光染料
使用方法
1. 制备模板DNA：选用合适的方法制备模板DNA。
2. 配制自备的5×LAMP引物混合液。
先加超纯水或自备TE缓冲液将自备的下列6种（或4种）引物干粉稀释到母液浓度，然后在一新的离心管中按表中所列体积加入各种引物母液和超纯水，最后得到1mL的5×LAMP引物混合液，此混合液足够250次20μL体系的LAMP扩增。如果需要配制的5×LAMP引物混合液体积异于1mL，则各成分的用量请按比例调整。引物混合液可以在-20℃放置2年。
| 引物名称 | 母液浓度 | 加母液量 | 在 5×LAMP 引物混合液中的浓度 |
| FIP 引物 | 100 μM | 80 μL | 8 μM |
| BIP 引物 | 100 μM | 80 μL | 8 μM |
| F3 引物 | 100 μM | 10 μL | 1 μM |
| B3 引物 | 100 μM | 10 μL | 1 μM |
| Loop F | 100 μM | 20 μL | 2 μM |
| Loop B | 100 μM | 20 μL | 2 μM |
| 超纯水 | 780 μL | 如果没有 Loop 引物，则用水替代 | |
| 终体积 | 1 mL |
- 在冰上融化2×LAMP MagicMix，混匀，稍离心。如果有N个样品，则在N+2个反应管中加入以下组份：
| 成份 | 样品管 | LAMP阳性对照 | LAMP阴性对照 |
| 2×LAMP MagicMix | 10 μL | 10 μL | 10 μL |
| 自备 5×LAMP 引物混合液 | 4 μL | -- | 4 μL |
| 自备模板 DNA | 1-100ng | -- | -- |
| LAMP 阳性对照模板-引物混合物 | -- | 4 μL | -- |
| 补自备超纯水到 | 20 μL | 20 μL | 20 μL |
4. 混匀，置于63℃保温60分钟。如果是在PCR仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴或水浴保温，没有热盖，必须覆盖50μL的石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，影响反应效率。
5. 产物取扩增产物5 μL直接上样（本产品A含有红色电泳示踪剂，不需要再加上样液，红色示踪剂的泳动速度相当于50bp的DNA）进行2-3%的琼脂糖凝胶电泳，可见LAMP特征性电泳图谱。
6. 结果分析：如果本试剂盒提供的阳性对照-引物混合物能够扩增而阴性对照不能扩出，则实验有效。如果阳性对照-引物混合物没有扩增出条带，则试剂盒的问题，请跟厂家联系。如果阴性对照（水作为模板）有扩增出条带，则说明LAMP样品或试剂有过去的扩增产物的污染，需要注意操作的规范性，如果不能解决，可以重新设计引物扩增新的靶片段。也可以使用不需要开盖的2×可视化LAMP MagicMix。
注意事项
1. 引物设计对成功扩增十分关键，尽量以保守区设计引物。
2. 引物至少包括F3/B3和FIP/BIP，加入环状引物F loop/B loop可以使反应速度大大提高。
3. 应优化引物序列、GC含量和尽量避免二级结构。
4. LAMP扩增具有特异性好、灵敏度高、时间快、不需要特殊仪器设备等优点。但太高的灵敏度使得其比普通 PCR 扩增更加容易污染导致假阳性。因此，必须高度重视扩增产物的污染。常规措施包括严格的实验分区、使用荧光定量等不开盖检测方法。实验室一旦遭到污染，很难去除，最好重新设计引物扩增新的靶片段。
5. 要确证扩增的为目标基因，可以使用特定的限制性酶切和/或Southern杂交。
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文献和实验长度可达 20kb，适合于各种 GC 含量的扩增，可用于多种样本的直接 PCR 如植物叶片、全血等。且扩增仅需 30s/kb，甚至于 2kb/s。如此卓越，爱不释手了吧？ 4. 选择直接扩增试剂盒对粗品扩增 vazyme 生产的各种直扩试剂盒，直接对粗品进行扩增，大大减少了实验的工作周期。如小鼠基因型鉴定可以直接使用 One Step Mouse Genotyping Kit，全血扩增可以直接使用 Blood Direct PCR Kit V2。
组织WHO、各国学者和相关政府部门的关注，短短几年，该技术已成功地应用于SARS、禽流感、HIV等疾病的检测中，在这次甲型H1N1流感事件中，日本荣研化学公司接受WHO的邀请进行H1N1 LAMP试剂盒的研制。通过荣研公司近十年的推广，LAMP技术已广泛应用于日本国内各种病毒、细菌、寄生虫等引起的疾病检测、食品化妆品安全检查及进出口快速诊断中，并得到了欧美国家的认同。LAMP方法的优势除了高特异性、高灵敏度外，操作十分简单，对仪器设备要求低，一台水浴锅或恒温箱就能实现反应，结果的检测也很简单，不需要像PCR
。 外泌体分离方法有很多种，包括超速离心、过滤离心、密度梯度离心、免疫磁珠和商用试剂盒。但是这么多方法中，我们通常推荐选用超速离心法进行提取和分离，因为超速离心方法得到的外泌体不管是从得率还是纯度上都比较好。其他方法的特点如下： 过滤离心：得率比较低 密度梯度离心：步骤繁琐，得率较低 免疫磁珠：特异性比较高，得率较低 商用试剂盒：价格高，效果一般 综合以上，超速离心法是目前价格适中、得率和纯度都能兼得的一种方法。 四、如何鉴定外泌
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