鼠尾直接PCR扩增试剂盒北京品牌

特别提示：包括鼠尾直接PCR扩增试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：鼠尾直接PCR扩增试剂盒
英文名称：Mouse Tail Direct PCR Kit
产品货号：ALH205
产品规格：100T|500T

本试剂盒采用独特的裂解缓冲液快速裂解鼠尾，释放的DNA无需纯化便可以作为模板，用高度耐抑制物的2×DirectAmp PCR Mix扩增，扩增产物可直接上样电泳。具有简单，高通量筛选等特点，一般扩增大小<2.5kb。

适用范围：鼠尾、动物组织（哺乳动物，海洋动物，昆虫等）、细胞等。

试剂盒组成：

组分	100T	500T
Buffer AD1	0.75ml	3.75ml
Buffer AD2	7.5ml	37.5ml
2×DirectAmp PCR Mix	1ml	5ml
ddH2O(PCR级)	10ml	50ml

保存条件：2×DirectAmp PCR Mix -20℃保存，避免反复冻融次数过多，3周内短时间使用可放4℃保存。其余常温或者4℃保存，有效期12个月。

操作步骤：
1．配制即用裂解液：按照10μl Buffer AD1 + 90μl ddH2O = 100μl比例混合配制成即用裂解液。每个样品需要75μl即用裂解液，具体量可以根据样品数量按照比例放大配制即可。即用裂解液可常温存放1个月。
2．取75μl裂解液于0.2mL PCR薄壁管中（没有PCR仪器者也可以用0.5ml离心管）。然后加入1-2mm的鼠尾或者2mm见方的组织（切记不可多加，多加反而抑制下游PCR），样品浸没在裂解液内。
3．98℃裂解30min（建议PCR仪上操作），根据情况裂解时间可以在10分钟-1小时内调整。
4．取出离心管迅速放冰上，加入75μl Buffer AD2，混匀，即可直接用做PCR模板或置于4℃或-20℃保存。
5．PCR扩增：
建议PCR条件(以20μl反应体系为例)

成分	用量	终浓度
裂解混合物模板	1-2μl	as required
2×DirectAmp PCR Mix	10μl	1×
Forward Primer(10μM)	0.4μl	0.2μM each
Reverse Primer(10μM)	0.4μl	0.2μM each
补ddH2O至	20μl	-

PCR循环：

温度	时间	循环数
95℃	5min	1
94℃	30sec	35-40
54～60℃	30sec
72℃	1kb/min
72℃	5～10min	1

注意事项：
1．如果扩增条带较弱，可以适当增加或者减少模板加入量，裂解混合物模板一般可以在1μl-4μl内调节。
2．如果非特异扩增较多，可调整退火温度，或者适当增减模板用量。
3．各溶液使用完毕后，应该立刻盖紧盖子，以免PH改变影响质量。

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