创伤性家兔股骨头坏死动物模型

创伤性家兔股骨头坏死动物模型
应用手术方法造成动物股骨颈骨折，从而在一定程度上模拟临床创伤性股骨头缺血性坏死的发病因素，通过局部创伤性破坏血供的作用，直接造成动物股骨头发生缺血性坏死的变化，为股骨头坏死的病理演进机制及其药理、药效的研究提供动物模型。
1  材料和方法：
1.1 材料：注射器，手术缝合器械，青霉素钠。
1.2  动物：家兔，种系，新西兰大耳白；雄性，体重2.8±0.5kg。标准饲料，单笼饲养。
1.3  造模方法
1.3.1  称重家兔，经耳缘静脉麻醉。
1.3.2  取髋关节外侧入路，切开关节囊；剪断圆韧带，从股骨头的内上方沿股骨头、颈的纵轴向大转子下方钻一细克氏针(1.2mm)，凿断股骨颈，造成股骨颈骨折；分离骨折2-3min后嵌插骨折端；将股骨头复位并逐层缝合伤口。注意股骨颈凿断部位应保持一致。术后不作外固定，抗生素治疗。
1.3.3  术后10日光镜下出现骨细胞坏死和空心骨陷窝。
2  评价指标
2.1  动物观察记录　动物麻醉清醒后,手术侧髋关节即可恢复运动。
2.2  大体标本和平片观察  实验侧髋关节囊有无增厚,关节囊内有无积液,关节软骨光泽,股骨头外观形态,骨质暴露情况,平片观察头颈部骨增生情况。
2.3  常规固定脱钙  冠状面剖开取材,常规乙醇梯度脱水,石蜡包埋切片, HE 染色,进行组织学观察。包括有变空的骨陷窝的百分数(骨坏死在组织学上的表现是骨陷窝变空，是判断新药能否逆转或减缓骨坏死的重要指标。从组织学角度讲，只有在骨组织出现空心骨陷窝数具有统计学意义时，才能认为骨组织发生了坏死。由此空心骨陷窝数是判断骨坏死模型是否成功的主要参数指标。空心骨陷窝的组织学计量通常采用百分数法，其计量方法为应用光镜观察骨组织切片，任选10个高倍视野，每个视野内计数50个骨陷窝，并分别数出变空的骨陷窝数从而求出变空的骨陷窝的百分数。)、骨小梁宽度、骨小梁体积及骨小梁密度；软骨厚度、软骨细胞数、软骨死亡细胞数；软骨下骨吸收区、软骨下血管数、软骨下与钙化区沟通的血管数；骨髓血细胞数、骨髓脂肪细胞数、骨髓最大脂肪细胞直径。
2.4  骨组织血气分析指标  股骨头血液内p02、pC02；股骨头内血液pH。
2.5  骨组织生化学指标：骨钙、骨磷；氨基己糖、羟脯氨酸。
2.6  整体指标
2.6.1  体重、体温。
2.6.2  血液生化指标：包括血脂(三酰甘油、胆固醇)
2.6.3  血液流变学指标：包括全血黏度高切值、全血黏度低切值，血浆黏度，血沉，血细胞比容。
3  判断标准
3.1 动物观察记录　动物麻醉清醒后,手术侧髋关节即可恢复运动,动物在术后表现以健侧髋关节负重为主,但实验侧髋关节活动范围与健侧无明显差别,观察期内动物无死亡,手术切口无感染。
3.2 大体标本观察及平片结果　
3.2.1 大体标本观察  实验侧髋关节囊有不同程度增厚,关节囊内有少量清亮积液,关节软骨失去光泽,呈焦黄色。术后1 周,关节软骨尚平整；后2 周变粗糙；术后6 周可见股骨头变扁平,部分关节软骨下骨质暴露,沿股骨头冠状面切开,肉眼见头颈部存在明显骨坏死病灶。3.2.2 平片观察  术后2 周,较对照侧股骨头无明显改变,术后6 周,实验侧股骨头稍偏平,头颈部显示骨增生,头内骨小梁排列未见明显紊乱。
3.3 组织病理学观察　
3.3.1 术后1～2 周,光镜下见软骨层变薄,软骨基质失去光泽,胶原纤维排列紊乱,大部分软骨陷窝中软骨细胞消失,残存的软骨柱层次不全；
3.3.2 术后4～6 周,软骨表面粗糙不平,明显变薄,部分软骨全层消失,其下骨质暴露,镜下见软骨下骨小梁骨折,骨小梁在术后1～2 周出现吸收变细,小梁内的骨细胞大部坏死,表现为胞核团缩,碎裂或骨陷窝空虚,骨小梁表面的骨内膜层消失,骨髓组织呈颗粒状坏死,存活骨髓组织稀少。术后4 周,头颈部骨髓组织及毛细血管向头内增生,股骨头内残存的骨髓组织也出现增生,术后6 周出现典型的骨坏死病灶,富含成纤维样母细胞的结缔组织及毛细血管向坏死的骨小梁间伸展,在坏死的骨小梁表面及骨小梁间可见功能活跃的成骨细胞及类骨质形成,在增生的纤维结缔组织内,可见梭状的成纤维样母细胞聚积成团并向成骨细胞演变,合成的骨基质包埋自身直接形成骨小梁结构。
3.3.3 其他各检测指标均要有改变，且与正常对照在统计学上有显著性著异
3.3.4 正常股骨头均见髓腔正常骨髓组织,骨小梁陷窝内骨细胞饱满。