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- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
52
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
30T
英文名称：
产品规格：30T
发货周期：1～3天
G01高尔基体染色试剂盒是利用G系列探针进行细胞高尔基体特异性染色的试剂盒。本试剂盒中的G01高尔基体染色探针为绿色荧光标记的细胞膜探针，具有465/535nm的最大激发/发射波长。
G系列探针是对活细胞的高尔基体进行选择性染色的一类荧光染料，该系列探针可以选择性标记高尔基体，当与高尔基体结合后其荧光强度大大增强，被激发后可以发出绿色的荧光，具有很高的淬灭常数和激发态寿命。
以96孔板每孔200μl染色液计，本试剂盒小包装可以染色50个样本。
储存条件-20℃避光保存。
有效期6个月。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤：1．高尔基体G01绿色荧光染色试剂盒价格用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
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注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验。 吖啶橙染色法胚胎小鼠肝脏血涂片吖啶橙染色?示幼红细胞核呈橙黄色荧光。胞质呈绿色荧光，其中RNA和多糖呈红色荧光 (2)该方法可用于恶性肿瘤如宫颈癌脱落细胞普查等。非典型增生细胞呈现荧光增强，增生的细胞胞质呈强荧光。恶性肿瘤细胞呈火焰或橘红色荧光。(3)在荧光显微镜下区分活细胞和死细胞时。可直接将少量细胞悬液与0．01％吖啶橙工作液混合，镜下观察。活细胞的核呈黄绿色荧光。而死细胞呈红色荧光，后者系溶酶体酶释放所致。吖啶橙浓度过高如l：500，或过低如1：100000时，均影响结果的准确性和可信
【求助】请问单独的GFP（绿色荧光蛋白）是不是由内质网核糖体合成？
andrew240 请问单独的GFP（绿色荧光蛋白）由内质网核糖体合成，然后进入高尔基体吗？还是在胞浆核糖体合成？ 有没有相关文献证明这个的？ 我想找一个确定不在内质网合成的蛋白作为对照，不知GFP合不合适。 谢谢 loneman 根据我看的教科书好像蛋白都是在内质网核糖体上翻译的吧？ zhujoker 我也看看了相应的知识，感觉是长进
条件下 220g 离心 5min。 19、将类器官沉淀重悬于 700μl 预冷的 DMEM / F12中，使用移液器吹打数次，机械地破坏类器官。 20、将所得细胞悬液重复 8-12 步骤，完成传代。 类器官冻存 21、取 1-4 个孔的类器官，消化离心后取细胞沉淀，加入 1ml 细胞冻存液。 22、将细胞重悬后转移至冻存管中，利用程序降温盒缓慢降温至 -80℃。 23、第二天，将样品转移到液氮中长期储存。 类器官复苏 24、将液氮冻存的 OC 类器官放置在 37℃ 水浴锅中进行解冻，水浴
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