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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
335
- 英文名:
HM Taq DNA polymerase
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
250U|500U
特别提示:包括高特异性热启动Taq DNA聚合酶在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:高特异性热启动Taq DNA聚合酶
英文名称:HM Taq DNA polymerase
产品货号:WH0070
产品规格:250U|500U
本制品采用了创新的合成亲和性配体技术,该配体可以以一种温度依赖性的方式来可逆性地阻断酶的活性。该酶与一般Hot-start酶不同之处在于,一般的Hot-start酶只在第一步温度升高之前封闭酶的活性,而HM Taq DNA聚合酶利用抑制性配体通过温度调节方式封闭HM Taq DNA聚合酶的底物结合位点,温度低于40℃时,形成非活性的酶-抑制剂复合物,当温度升高至引物特异性的退火温度时,结合平衡向模板-特异性引物复合物形成方向移动,因此最大限度的减少PCR扩增全程中的非特异性扩增产物产生,大大提高了PCR反应的精确性。PCR产物3′端为A,可直接用TA载体克隆。一般用于高灵敏度和有较强背景的基因组扩增(如基因组中某个特定基因位点或外源病原体的检测)、DNA序列测定、Multiplex PCR、TA克隆等。
产品特点:
· HM Taq DNA polymerase无需加热激活;
· PCR全程持续控制退火温度;
· PCR扩增靶序列长度可达5kb;
· PCR过程无变性抗体等蛋白污染;
·该酶最适延伸温度为65℃,可在60℃-70℃之间调整。
产品组成:
| 组分 | WH0070-1 | WH0070-2 |
| HM Taq DNA Polymerase | 250U | 500 U |
| 10×HM Taq Buffer | 1.8ml | 1.8ml |
储存条件:-20℃保存
活性定义:
1单位(U)HM Taq DNA polymerase活力定义为在74℃、30min内,以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,将10nmol的脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。
质量控制:
SDS-PAGE检测纯度大于99%;经检测无外源核酸酶活性;PCR方法检测无宿主残余DNA;能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因;室温存放一周,无明显活性改变。
使用举例:
注意:以下举例为常规PCR反应系统,仅供参考。实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异,需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物长短等具体情况,设定最佳反应条件。该酶最适延伸温度为65℃,可在60℃-70℃之间调整。以人基因组DNA为模板,扩增1 kb的片段
1.反应体系的建立:50μl反应体系如下(可根据比例放大或缩小反应体系):
| 组份 | 体积 |
| Template | <1μg |
| Primer 1(10μM) | 1 μl |
| Primer 2(10μM) | 1 μl |
| 10×HM Taq Buffer | 5 μl |
| dNTP Mixture(2.5mM) | 4 μl |
| HM Taq (2.5 U/μl) | 0.5-1 μl |
| ddH2O | 补至50μl |
2.PCR反应循环的设置:
3.结果检测:反应结束后取5 μl反应产物,琼脂糖凝胶电泳检测。
我公司销售的高特异性热启动Taq DNA聚合酶优惠促销,HotMaster Taq DNA polymerase质量上佳,价格普惠,欢迎广大新老客户踊跃订购。
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对于 Taq 酶扩增性能更强。 1. 选择热启动酶降低非特异性扩增 在使用 Taq 酶进行扩增时,有时会出现非特异性扩增,可能的原因可以从模板、引物、体系、程序中一一排查。如模板是否被污染,引物特异性如何,Mg2+浓度偏高等等,其中一个不可忽视的原因是 DNA 聚合酶的种类是否合适。如果排查了其它原因仍旧有非特异性产物,可以选择热启动酶重新实验,即可有效减少或消除体系中其它产物的积累。常用的热启动酶分为两类:一类是化学法修饰的热启动酶,如 Ace Taq ,预变性 95℃5 - 10 min 即可
本文根据自身实验经验总结,针对 PCR 实验过程出现的问题举例,提供可实施的解决方法。并根据经验列举了提高 PCR 反应特异性的方法。 问题 1:假阴性(无扩增产物) 现象:正对照有条带,样品无条带 可能原因: · 模板:含有?Taq 酶抑制剂、杂蛋白,模板上样量低或模板降解 · 引物:引物降解,引物设计不合理 · 试剂:酶失活,buffer 不合适 · 反应条件:退火温度高,延伸时间短 解决方法: · 纯化模板并重新提取,并检测模板是否含有抑制剂 · 重新设计引物并低温保存 · 优化
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