通用型LAMP试剂盒(不含染料)现货供应

特别提示：包括通用型LAMP试剂盒(不含染料)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：通用型LAMP试剂盒(不含染料)
英文名称：Universal LAMP Kit
产品货号：BTN190601
产品规格：50T

本试剂盒是可以用于LAMP环介导等温扩增，LAMP是近年出现的一种新颖的等温核酸扩增方法。它利用4条模板专一的特异引物和具有链置换能力的DNA聚合酶，在等温条件下(63℃左右)30～60分钟完成扩增。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于PCR技术，同时还不需要模板的热变性、温度循环、等过程。目前已成功应用于人类及动植物、细菌、病毒、寄生虫、真菌等病原体的快速检测。

试剂盒特点：
1．即开即用的2×LAMP MagicMix。
2．高特异性，由于同时使用4～6条特异引物，所以特异性比PCR更高。
3．高扩增效率，扩增效率可达到10⁹～10¹⁰，比PCR灵敏一个数量级，可检测到单拷贝的DNA分子。
4．65℃左右等温扩增，可以不需要贵重的热循环仪。
5．即开即用，包含了除引物和模板DNA外的所有成份，十分方便。
6．本试剂盒足够50次20μL体系的LAMP扩增。
7．提供扩增对照，便于在遇到困难时分析原因。
8．本产品只能用于科研，不能用于临床。

试剂盒组成：

组分	规格
2×LAMP MagicMix(不含染料)	100μL
LAMP阳性对照模板-引物混合物	45μL

保存条件：-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1．制备模板DNA：选用合适的方法制备模板DNA。
2．配制自备的5×LAMP引物混合液。先加超纯水或自备TE缓冲液将自备的下列6种（或4种）引物干粉稀释到母液浓度，然后在一新的离心管中按表中所列体积加入各种引物母液和超纯水，最后得到1mL的5×LAMP引物混合液，此混合液足够250次20μL体系的LAMP扩增。如果需要配制的5×LAMP引物混合液体积异于1mL，则各成分的用量请按比例调整。引物混合液可以在-20℃放置2年。

引物名称	母液浓度	加母液量	5×浓度
FIP引物	100μM	80μL	8μM
BIP引物	100μM	80μL	8μM
F3引物	100μM	10μL	1μM
B3引物	100μM	10μL	1μM
Loop F	100μM	20μL	2μM
Loop B	100μM	20μL	2μM
超纯水		780μL

3．在冰上融化2×LAMP MagicMix，混匀，稍离心。如果有N个样品，则在N+2个反应管中加入以下组份：

加入物	样品管	阳性对照	阴性对照
2×LAMP MagicMix(不含染料)	10μL	10μL	10μL
自备5×LAMP引物混合液	4μL	-	4μL
自备模板DNA	1-100ng	-	-
LAMP阳性对照模板-引物混合物	-	4μL	-
自备超纯水至	20μL

注意：此步可加入自备的各种LAMP染料，这样反应结束后可以根据反应液的颜色变化或实时荧光强度变化来判断是否有扩增，不需要开盖，避免污染。如果加入了荧光染料，则需要在荧光定量PCR仪上进行反应和实时检测。
4.混匀，置于63℃保温60分钟。如果是在PCR仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴或水浴保温，没有热盖，必须覆盖50μL的石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，影响反应效率。
5.产物取扩增产物5μL上样，进行2-3%的琼脂糖凝胶电泳，可见LAMP特征性电泳图谱。
6.结果分析：如果本试剂盒提供的阳性对照-引物混合物能够扩增而阴性对照不能扩出，则实验有效。如果阳性对照-引物混合物没有扩增出条带，则试剂盒的问题，请跟厂家联系。如果阴性对照（水作为模板）有扩增出条带，则说明LAMP样品或试剂有过去的扩增产物的污染，需要注意操作的规范性，如果不能解决，可以重新设计引物扩增新的靶片段。也可以使用不需要开盖的2×LAMP MagicMix(含可见光染料)。

注意事项：
1．引物设计对成功扩增十分关键，尽量以保守区设计引物。
2．引物至少包括F3/B3和FIP/BIP，加入环状引物F loop/B loop可以使反应速度大大提高。
3．应优化引物序列、GC含量和尽量避免二级结构。
4．LAMP扩增具有特异性好、灵敏度高、时间快、不需要特殊仪器设备等优点。但太高的灵敏度使得其比普通PCR扩增更加容易污染导致假阳性。因此，必须高度重视扩增产物的污染。常规措施包括严格的实验分区、使用荧光定量等不开盖检测方法。实验室一旦遭到污染，很难去除，最好重新设计引物扩增新的靶片段。
5．要确证扩增的为目标基因，可以使用特定的限制性酶切和/或Southern杂交。

我公司销售的通用型LAMP试剂盒(不含染料)现货供应，质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。