柱式小量血液基因组DNA提取试剂盒(0.1～20ml)

特别提示：包括柱式小量血液基因组DNA提取试剂盒(0.1～20ml)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：柱式小量血液基因组DNA提取试剂盒(0.1～20ml)
英文名称：Blood Genomic DNA Mini Extraction Kit(0.1-1ml)
产品货号：WE0175
产品规格：50次|200次

  本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的全血(用柠檬酸盐、EDTA或肝素等抗凝剂处理过的血液样品)、血浆、血清、血沉棕黄层、淋巴细胞、无细胞体液等样本中提取总DNA，包括基因组DNA，线粒体DNA及病毒DNA。本品可以处理0.1-1ml的全血，最高得率可达30μg，可纯化获得大小为100 bp到50 kb的DNA，纯化的DNA产量高、质量好，最大限度去除蛋白、色素、脂类及其他抑制性杂质污染，可直接用于PCR、荧光定量PCR、酶切和Southern Blot等实验。

试剂盒组成：

组份	50次	200次
Buffer RCL	125ml	2×260ml
Buffer GR	15ml	50ml
Buffer GL	15ml	50ml
Buffer GW1(浓缩液)	13ml	52ml
Buffer GW2(浓缩液)	15ml	50ml
Buffer GE	15ml	60ml
蛋白酶K	12.5 mg	50 mg
蛋白酶K 储存液	1.25ml	5ml
吸附柱 DM及收集管	50套	200套

产品特点
1、纯度高：提取的基因组DNA可直接用于下游PCR、荧光定量PCR、酶切等各种实验。
2、提取量大：可从0.1-1.0ml的全血中提取基因组DNA。
3、兼容性强：适用于处理各种抗凝血液和细胞样本。

自备试剂：无水乙醇

实验前准备及重要注意事项：
1、向蛋白酶K 中加入蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
3、本试剂盒最多可以提取0.1-1ml全血样品或1×107个白细胞。
4、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
5、使用前请检查Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GL于56℃水浴孵育重新溶解。
6、试剂盒中的Buffer RCL浑浊后不能继续使用。

操作步骤：
1、样品处理：
1.1、提取200 ul血液样品时，向离心管(自备)中加入样本后，可直接进行下一步实验。
1.2、当血液样本量小于200μl时，加入Buffer GR补足至200μl，再进行下一步实验。
1.3、当血液样本量超过200μl时，加入1~2.5倍体积的Buffer RCL，轻轻涡旋或颠倒混匀，12000rpm(~～13400×g)离心1分钟，小心吸弃上清液，如果沉淀中还有红色，可以重复以上步骤一次。然后向沉淀中加入200μl Buffer GR，震荡至彻底混匀,再进行下一步实验。
1.4、如果处理血液样本为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血，其红细胞为有核细胞，血液样本量为5-20μl，可加入Buffer GR，补足至200μl后进行后续实验。
注意：如果下游试验对RNA敏感，可加入4μl RNase A(100mg/ml)溶液，震荡15秒，室温放置5分钟。RNase A本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0225S。
2、向以上溶液中加入20μl 蛋白酶K ，混匀。
3、加入200μl Buffer GL，震荡至彻底混匀。
注意：不要将蛋白酶K 和Buffer GL进行预混。
4、56℃孵育10分钟，其间颠倒混匀数次。
注意：孵育10分钟DNA的产量已经达到最大，继续延长孵育时间对DNA产量和纯度没有影响。
5、加入200μl无水乙醇，颠倒混匀数次。短暂离心，使管壁和壁盖上的液体集中到管底。
6、将步骤5所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱DM中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如果提取样品是小鼠或猴子等血红素难以除去的种属的血液基因组，建议重复步骤7。
8、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤8。
9、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
10、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中，向吸附柱的中间部位悬空加入50-200μl Buffer GE或灭菌水，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)如果要提高DNA的终浓度，可以将所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1 分钟。
3)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

储存条件：室温(15～30℃)。

我公司销售的柱式小量血液基因组DNA提取试剂盒(0.1～20ml)，质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。