免疫荧光试剂盒(大鼠源一抗)(DyLight488)

特别提示：包括免疫荧光试剂盒(大鼠源一抗)(DyLight488)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：免疫荧光试剂盒(大鼠源一抗)(DyLight488)
英文名称：Immunofluorescence kit For Primary Antibody From Rat (DyLight 488)
产品货号：ZN1846
产品规格：2ml|4ml|10ml

本试剂盒采用SABC系统，是专为免疫化学而设计的，用以显示组织或细胞中的抗原分布。DyLight是一种近年来被广泛应用的新型荧光染料，由于具有很好的光谱宽度、更强的荧光强度，更高的光学耐受性（抗淬灭性）和特异性，对pH不敏感、分子较小而渗透性更好的优势，标记的抗体比Cy2和FITC标记的更亮，但背景更低；DyLight 488-SABC，将链霉亲和素—生物素引入荧光系统，能进一步提高敏感性及降低背景。DyLight 488zuì大吸收峰 493nm；zuì大发射峰518nm。呈黄绿色。

试剂盒组成：

组分	规格
正常浓缩兔血清(稀释比1:10)	2ml/4ml/10ml
生物素标记兔抗大鼠IgG(参考效价1:100)	0.2ml/0.4ml/1ml
SABC-DyLight 488(参考效价1:200-800)	0.2ml/0.4ml/1ml

另附有三个滴瓶可供稀释试剂用

保存条件：4℃可保存一年，应避免冷冻。

石蜡片染色步骤：
1. 切片脱蜡至水。
2. 根据需要选择抗原修复方式及强度。可热修复、酶修复或不修复。
3. 封闭：滴加稀释的正常兔血清封闭液(稀释比 1:10),室温 20 分钟。甩干，勿洗。
4. 滴加适当稀释的一抗(大鼠IgG)，37℃孵育 1~2 小时或4℃过夜。PBS洗5分钟×3次。
5. 滴加稀释的生物素标记兔抗大鼠IgG(参考效价1:100),37℃孵育30分钟。PBS洗5分钟×3次。
6. 滴加稀释的 SABC- DyLight 488(参考效价 1:200-800)，37℃孵育30分钟。PBS洗5分钟×4 次。
7. 水溶性封片剂(ZN2946)或抗荧光衰减封片剂(ZN1974)封片。荧光显微镜观察。

建议：
1. 热修复可选用枸橼酸盐缓冲液(ZN1955)、EDTA抗原修复液(ZN1951)、PBS缓冲液、TBS缓冲液(ZN1953)等作为抗原修复液。
2. 酶修复可选用复合修复液(ZN1952)、抗原修复液Ⅰ(ZN1954，与热修复配合使用)、胰蛋白酶(ZN2944)、胃蛋白酶(ZN2945)消化组织。

除了免疫荧光试剂盒(大鼠源一抗)(DyLight488),，我公司还供应以下相关产品：



名称：Alexa Fluor 555抗兔免疫荧光染色试剂盒
货号：YT105
规格：>300次
本试剂盒含有Alexa Fluor 555标记的驴抗兔IgG(H+L)抗体，可以用于检测兔来源的相应一抗，观察到的颜色为非常鲜艳的红色。Alexa Fluor 555是一种常用的非常明亮的红色荧光探针。它比绝大部分常用的红色荧光探针更加明亮，更加不容易淬灭，而且背景更低。Alexa Fluor 555的荧光光谱和Cy3非常接近。Alexa Fluor 555的吸收峰555nm、发射峰565nm。本试剂盒提供了含有荧光标记抗体稳定剂的免疫荧光染色二抗稀释液，可以确保荧光标记抗体稀释后在4℃可以保存长达6个月，并且在6个月内至少可以重复使用10次。本试剂盒含有抗荧光淬灭封片液，可以使荧光更加持久。本试剂盒对于六孔板内的细胞样品或常规切片，至少可以检测300个样品。

试剂盒组份：
抗兔Alexa Fluor 555———————30μl
免疫荧光染色二抗稀释液—————50ml
抗荧光淬灭封片液————————15ml

注意事项：
1. 需荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。
2. 在使用抗荧光淬灭封片液的情况下可以减缓淬灭，但仍宜尽量避光，特别是需要尽量缩短在荧光显微镜下的观察时间。
3. 荧光物质均易发生淬灭，染色后宜尽快进行荧光显微镜下的观察。如果不能及时观察可以4℃避光保存，但存放时间通常不宜超过一周，随着存放时间的延长可能会导致观察效果越来越差。
4. 免疫荧光染色效果的好坏和一抗的关系非常密切。建议选购有较多文献报道的并注明可以用于免疫荧光染色的一抗用于本实验。
5. 如果观察时发现荧光过弱，可以适当提高一抗的浓度；如果荧光还是比较弱，可以适当提高荧光标记抗体的浓度。

储存条件：-20℃，有效期一年。

名称：Bradford蛋白浓度测定试剂盒
货号：ZN1872
规格：1盒
产品规格：
Bradford 染色液 100ml
BSA 标准品 20ml(2mg/ml)
产品描述：应用试管法可以测量100管，微孔板法可以测量400孔
产品保存：4℃保存，一年有效。
产品说明：Bradford 蛋白浓度测定法是目前常用的灵敏度较高的蛋白浓度测定方法之一。它是根据 Bradford 染液(考马斯亮蓝 G-250 染料)与蛋白结合，使染料的zuì大吸收峰从 A456变为A595，且测定的吸光值与蛋白浓度成正比关系的原理设计的。本法通过吸光值，推算蛋白浓度，实现了蛋白浓度测定的快速性和简便性。灵敏度高，比 Lowry 法大约高四倍，zuì低蛋白检测量可达 1μg。测定速度快、简单，仅需一种试剂即可，且不受大多数样品中化学试剂的影响。
注意事项：
1．各取样操作应准确无误。
2．在100～1500μg/ml的浓度范围线性zuì佳。
3．加入样品后的试剂，混合均匀后，静置反应，测量过程中切不要再次剧烈晃动。
4．Bradford 染色液使用前，应充分混匀。同时，酶标仪需预热 20min。
5．Bradford 染色液需恢复到室温再使用，有利于提高检测的灵敏度。
6．每次试验都必须建立标准曲线。另外，为了得到更精确的结果，每个蛋白梯度和样品均需做复孔。
7．Bradford法测定蛋白浓度对大多数化学物质的兼容性比较好，比如对还原剂DTT的兼容性高达5mM。但会受到略高浓度的去垢剂影响，如，SDS需低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20/ 60/80低于0.015%等。(详情见附录)对于含去垢剂的样品，建议使用BCA蛋白定量检测试剂盒。
使用说明：
一、配制 BSA 标准品
标准品稀释液为蛋白样品的溶解液，原则上蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。
但也可用 0.9%的NaCl或1×PBS 进行稀释。
二、检测方法
A．试管法检测(线性范围：100-1500μg/ml)
1.各取20μl不同浓度标准品和待测样品加入到反应管中；
2.加入1ml Bradford 染色液，混匀。室温孵育10min。
3.分光光度计上测定 595nm 处的吸光度，用装满水的比色皿对仪器校零。之后测定所有样本浓度。
4.根据 BSA 标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD 值即zuì终的读数)，绘制标准曲线(X-蛋白浓度μg/ml；Y-zuì终的OD595nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
B．标准微孔板检测(线性范围：100-1500μg/ml)
1.各取 5μl 各浓度标准品和待测样品加入到微孔板中；
2.每孔加入 250μl Bradford 染色液，振荡 30s 充分混匀。盖上微孔板，室温孵育10min。
3.酶标仪上测定595nm处的吸光度。或者其他575~615nm波长范围内的吸光度，但是相对于595nm，吸光度会存在~10%的损失。
4.根据 BSA 标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD 值即zuì终的读数)，绘制标准曲线(X-蛋白浓度μg/ml；Y-zuì终的OD595nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
注意：由于酶标板的光径比比色皿短，经酶标板检测得到的OD595nm会低于比色皿检测所得，因此可能降低本法的检测下限。要得到更高的OD595nm，可使用 7-10μl 标准品/待检样本，和 250μlBradford 染色液来进行检测。