LBIS Bovine Albumin ELISA Kit

LBIS牛血清白蛋白ELSIA试剂盒

LBIS Bovine Albumin ELISA Kit
 

 

 

 

白蛋白存在于细胞和体液中，主要类型为高水溶性的蛋白，同时也存在糖基化的白蛋白。血清白蛋白分子量约为69 kDa，占血浆蛋白56-60%，等电点为4.9，在肝细胞中合成。

血清白蛋白是血清蛋白的主要组成部分，在维持渗透压中起重要作用，在生理上与脂肪酸、胆红素和甲状腺素等难溶于水的物质结合，并协助其运输。血清白蛋白浓度的降低，通常是由于肝硬化等引发的白蛋白生物合成减少、营养不良或热性病损耗的体蛋白所导致的血液中白蛋白的消耗，以及肾障碍引起的尿液渗出等原因所致。

在健康人的尿液中，血清白蛋白的排泄量每天仅在30 mg以下，但由于患肾脏疾病时渗出至尿液的白蛋白会增多，因此患肾小球肾炎、肾病综合征、糖尿病性肾病等肾脏疾病时的尿白蛋白水平会升高。另外，发烧、高血压、充血性心力衰竭、尿路感染等情况下，尿白蛋白水平也有可能会升高。即使是健康人，在经过剧烈运动或肌肉劳动后、热水沐浴后、精神兴奋、压力和摄入大量蛋白后以及月经前，尿白蛋白会短暂性增加，这种现象也被称为生理性或功能性蛋白尿或运动性蛋白尿。此外，仅在站立时才出现的蛋白尿主要发现于年轻人中。

人类中有一种罕见的先天性疾病，称为低白蛋白血症，也称为无白蛋白血症，但正确来说是含有极少量白蛋白，临床症状为轻度水肿和中度低血压，尚未观察到肝功能异常或蛋白尿。动物中大鼠有无白蛋白血症analbuminemia的模型，是由佐佐木研究所的Sumi Nagase老师以SD大鼠建立的，被称为NAR（Nagase analbuminemia rat)。

血清白蛋白的检测，使用TIA检测系统宏观上效果不错，FUJIFILM Wako Shibayagi也可以提供大鼠和小鼠的自动检测仪器用TIA试剂盒，然如果要实现高灵敏度和微量检测则需用到ELISA。富士胶片和光Shibayagi的LBIS Albumin ELISA Kit除了可定量检测血液中、尿液中与疾病相关的白蛋白外，还可应用于体外白蛋白生物合成实验系统、从培养体系中纯化得到的生物药中FBS等的残留污染检测，NAR中肝细胞和肝组织移植后白蛋白产生的标记成功与否的研究等等。

 

◆试剂盒特点

 

●　可快速检测（总反应时间：2.5 h）

●　检测范围：0.78~50 ng/mL

●　所需样品量：100 μL/well

●　使用环保的防腐剂

●　所有试剂均为即开即用的溶液

●　高检测准确性和可重复性

 

使用目的

 

●　检测培养基来源的牛血清白蛋白（BSA/FBS）

●　细胞和组织加工产品

●　单克隆抗体生产工艺

●　重组蛋白生产工艺

 

 

◆试剂盒的组成

 

组成内容	状态	包装
（A）抗体固定96孔板（干板型）	清洗后使用	96 wells（8×12）/1支
（B）标准白蛋白溶液（500 ng/mL）	稀释后使用	200 μL/1支
（C）缓冲液	直接使用	60 mL/1支
（D）过氧化物酶结合抗白蛋白抗体	稀释后使用	200 μL/1支
（F）显色液（TMB）	直接使用	12 mL/1支
（H) 反应停止液（1M H2 SO4） ※ 使用注意	直接使用	12 mL/1支
（I）浓缩清洗液（10×）	稀释后使用	100 mL/1支
封板膜	——	3张
使用说明书	——	1份

 

 

◆交叉反应性

 

物种	交叉反应率（%）
牛	100%
小鼠	小于0.05%
大鼠	小于0.05%
人	小于0.05%

 

※ 交叉反应率为1000 ng/mL浓度下检测的数据。

 

 

◆样品信息

 

检测样品中牛白蛋白残留污染

※ 检测时，制备合适倍率的缓冲液，用作检测用的稀释样品。

※ 请注意本试剂盒对于检测牛血清·血浆样品十分敏感。需稀释约一百万倍。

 

 

◆检测范围

 

0.78～50 ng/mL（校正曲线范围）

 

 

◆Validation data

 

准确度测试（批次间差异）

 

样品	A	B	C	D
1	46	23.9	11.7	1.72
2	45.3	23.5	11.8	1.84
3	43.9	24.2	11.5	1.7
4	44.8	22.5	11.4	1.76
5	48	24.7	12.3	1.75
mean	45.6	23.8	11.7	1.75
SD	1.561	0.825	0.353	0.053
CV（%）	3.4	3.5	3	3

 

单位：ng/mL

 

 

可重复性测试（批次间差异）

 

检测日/样品	E	F	G
第0日	1.48	5.7	24.3
第1日	1.55	6.2	25.6
第2日	1.5	6.35	25
第3日	1.56	6.25	25
mean	1.52	6.12	25
SD	0.042	0.288	0.545
CV（%）	2.8	4.7	2.2

 

单位：ng/mL n=3

 

 

添加回收测试

 

样品H

 

添加量	实测值	回收量	回收率
0	3.06	-	-
1.5	4.58	1.52	101
3	5.8	2.74	91.3
3.75	6.79	3.73	99.5

 

单位：ng/mL n=3

 

 

样品I

 

添加量	实测值	回收量	回收率
0	10.6	-	-
3.95	14.7	4.1	104
11.9	22.3	11.7	98.3
19.8	29.4	18.8	94.9

 

单位：ng/mL n=3

 

 

◆稀释直线性测试

 

使用连续性稀释缓冲液分4个阶段梯度稀释2个血清样品，并进行检测，结果显示直线回归的R²从0.9996变为了0.9997。

 

 

◆操作方法

 

抗体包被96孔板（干板型）

↓ 清洗4次

样品或标准溶液 100 μL

↓ 搅拌，室温(20～25 ℃)，静置反应1 h 

↓ 清洗4次

过氧化物酶结合抗白蛋白抗体 100 μL

↓ 搅拌，室温(20～25 ℃)，静置反应1 h 

↓ 清洗4次

显色液（TMB） 100 μL

↓ 搅拌，室温(20～25 ℃)，静置反应30 min 

反应终止液（1M H₂.SO₄）

↓ 搅拌

吸光度检测（主波長450 nm、副波長620 nm：600～650 nm）

 

 

◆FBS/FCS，液体培养基检测示例

 

样品	白蛋白检测值(mg/mL)
FBS-1	17.3
FBS-2	17.3
FCS-1	10.5
FCS-2	12.5
RPMI-1(10 %FBS)	1.39
RPMI-2(10 %FBS)	1.73

 

 

◆牛血清白蛋白（BSA）检测用试剂

 

牛血清白蛋白（BSA：Bovine Serum Albumin）

 

产品编号	产品名称	校正曲线范围	样品量 （稀释样品）
631-07091	LBIS Bovine Albumin ELISA Kit LBIS牛血清白蛋白ELSIA试剂盒	0.78～50 ng/mL	100 μL

 

已经验证可以检测样品中掺入的牛血清白蛋白，以及来源于生产过程的终产品中牛血清白蛋白残留杂质。

本产品仅供实验研究用，不可作临床应用。