质谱级赖氨酰肽链内切酶 Lysyl Endopeptidas

质谱级赖氨酰肽链内切酶

Lysyl Endopeptidase

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　　本产品是质谱分析前处理时最常用的蛋白分解酶即赖氨酰肽链内切酶，该酶可以特异性切除赖氨酸基团C末端的多肽，可用于蛋白测序分析和Lys-X化合物的酶合成。若同时使用赖氨酰肽链内切酶和胰酶，可更好地切断赖氨酸 基团的多肽，增加多肽的数量。产品已按照使用习惯做成小包装，是方便使用的冷冻干燥品。

 

来源：细菌

外观：冻干粉（包含2 mmol/L Tris-HCl缓冲液，pH8）

活性：0.03～0.07 AU/vial

分子量：27,000(琼脂糖过滤)，30,000（SDS-PAGE）

溶解性：溶于水或缓冲液

稳定性：溶解于pH值5.0-12.0的Tris缓冲液中，可在4℃稳定保存2年；在pH值6.0-11.0 30℃时能稳定保存，但温度超过50℃时不稳定。

最适pH值：9.0~9.5

等电点：6.9~7.0 

底物特异性：

可水解底物——Tos-Lys-OMe, Bz-Lys-NH₂, Bz-Lys-pNA, Lys-pNA

不可水解底物——Bz-Arg-NH₂, Bz-Arg-pNA, Arg-pNA

抑制剂：DFP，PMSF，TLCK

 

◆特点

 

●  高特异性、高蛋白质消化率、适用于蛋白质谱分析

●  提高裂解效率、增加肽段数量

●  根据使用量特意制备小包装，方便使用

 

◆应用

分别采用胰蛋白酶(Tp)、赖氨酰肽链内切酶(Lys-C) 和Tp与Lys-C联用进行胶内酶切的效果比较。

牛血清蛋白BSA 的条带(100ng) 通过SDS-PAGE 获得，然后分别用Tp、Lys-C和Lys-C+Tp进行酶切，再用MALDI-TOFMS法进行分析。

这些蛋白酶的实验效果见下表。

 

表 1：Tp、Lys-C和Lys-C+Tp的结果对照

这些结果表明Lys-C酶解的错误裂解率最低。Tp酶解时加入Lys-C后，错误裂解率有所降低，同时，可以鉴定出更多的多肽。

	Tp	Lys-C	Lys-C+Tp
裂解位点	精氨酸和赖氨酸的C端	赖氨酸的C端	精氨酸和赖氨酸的C端
错误裂解率 (  错误裂解所占比例  )	多(8%)	很少(0%)	少(3%)
鉴定出的多肽数量	17	19	22

 

胰蛋白酶 (Tp)( 图 a) 和赖氨酰肽链内切酶 (Lys-C)+Tp ( 图 b) 酶切后的质谱结果对照图。

Lys-C+Tp酶切后，可以在m/z=2000时得到吸收峰，而单独的Tp酶切在m/z=2000时没有吸收峰。该结果表明Lys-C可以提高测序覆盖度。

( 数据由大阪医疗中心和妇婴健康研究所Y. Wada博士提供 )

 

赖氨酰肽链内切酶

赖氨酰肽链内切酶，最初由Masaki等人从土壤细菌中分离得到。该酶可以特异性剪切赖氨酸残基C 末端和S-氨乙基半胱氨酸残基的肽键，用于蛋白测序和Lys-X 化合物的酶催化合成。该酶稳定性高，在4M 尿素或0.1%SDS 溶液中30℃孵育6小时之后，仍然拥有完整的生物活性。

外观	冻干粉（包含ca. 10% Tris-HCl buffer，pH8）	活性	见包装
分子量	27,000（凝胶过滤）；30,000 (SDS-PAGE)	溶解性	易溶于水或缓冲液
最佳pH	9.0-9.5（酰胺酶的最佳活性pH）	等电点	6.9-7.0
抑制剂	DFP、PMSF、TLCK	来源	细菌
稳定性	溶于pH 值5.0-12.0 的缓冲液中，可于4℃稳定保存。溶于pH值6.0-11.0的缓冲液中，可于30℃稳定保存，但是50℃及以上不稳定。
单位定义	一单位酰胺酶(AU) 指在30℃ pH 9.5 时每分钟产生1 μmol C6H6N2O2所需的酶量。
底物特异性	水解底物：Tos-Lys-Ome、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA
	非水解底物：Bz-Arg-NH2、Bz-Arg-pNa、Arg-pNA