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2-8℃
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3年
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无
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100
- 供应商:
上海晅科生物科技有限公司
- 规格:
500ml
二抗稀释液(Primary Antibody Dilution Buffer)含信号放大剂,特别适用于表达量低的蛋 白,对抗原抗体的结合有明显的放大效应。新一代的高效二抗稀释液,不含血清和白蛋白,确保 极高的信噪比,总体效果明显优于传统的基于BSA、脱脂奶粉等的二抗稀释液,此产品无需添加 任何额外的试剂,可以直接用于二抗的稀释。
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文献和实验重要。1.转膜时间2. 转膜过程环境温度3. 转膜缓冲液使用次数4.转膜缓冲液中甲醇比例(v/v)(三)一抗使用*使用IRS1(150kDa)、pPERK(125kDa)和内质网应激XBP1(29/55kDa)抗体等检测小鼠肝组织探讨一抗在多种条件下对结果影响(IRS1,pPERK和 XBP1 用于 WB 检测难以出现清晰条带,因此选择合适的一抗及孵育条件就很关键)。1.一抗稀释溶剂2.一抗稀释比例3.一抗孵育时间(四)二抗使用*高浓度的二抗会导致大量非特异性结合,造成WB背景较深。1.二抗稀释比例 (洗释
背景较深。1. 二抗稀释比例 (洗释液 0.1%TBST)(五)一、二抗孵育后 TBST 洗涤时间* 一抗和二抗孵育后 TBST 洗涤时间和次数会影响背景深度。一张漂亮的 WB 结果受多个关键因素影响,以上对比实验给出显示最核心的影响因素是一抗选择和合适的转膜条件。对于一抗而言,选择具有一定文献引用数的品牌不仅更容易得到清晰可信的结果同时更能够得到同行认可。其二,针对特定分子量大小靶蛋白而选择适当转膜条件(转膜时间,转膜缓冲液和必要低温环境)能够将 SDS-PAGE 胶上蛋白样品尽可能完全转移
是通过倍比降低一抗的稀释比(从1:1K降到1:500到1:250到。。。;注:二抗稀释比不要轻易改变,增加二抗浓度对WB结果不会有太明显的改变),摸索到一个可以标出信号的条件。此时,由于一抗浓度过高,背景可能非常高,但背景的问题可以再调整,有没有特异性条带却没办法改变;实在没有靶蛋白的信号,只能更换别的公司生产的抗体。 那么如何通过改变抗体稀释液的配方,寻求抗体孵育的最佳条件呢? 首先要认清,抗体稀释液没有一个绝对通用的配方;一种抗体一个脾气。 其次,抗体稀释液的配方要兼顾与特异性抗体
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