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华科鉴联基因科技
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种属间细胞交叉污染及种属鉴定
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次
一、细胞种属鉴定及种属间交叉污染质控
背景介绍
细胞系作为正常或肿瘤组织的模式细胞被广泛应用于科学研究和药物开发,然而很大一部分的细胞系被错误标记或被其它个体、组织、种系来源的细胞所替代,由于科学界无法解决此类问题以致大量因使用错误鉴定的细胞系而导致误导或存在潜在错误的学术论文发表。
培养物的交叉污染以及随后污染细胞的过量生长是另一个引起细胞系错误鉴定的常见原因。这种情况发生的几率在以下条件会增加:试剂的共用、操作时反复使用相同的未经彻底消毒的工具及设备、在没有充分分离每一细胞类型情况下同时对多个培养物进行操作。当交叉污染发生时,一种细胞类型迅速生长而超过另一种,在4-5次细胞传代后,一个纯的污染细胞培养物将会形成。
在使用其它物种的滋养层(例如小鼠3T3细胞)来繁殖人类干细胞或原始细胞时有意地共培养会导致交叉污染或人类细胞系过生长。正常情况下,滋养层细胞处于无增殖状态,但只要生长抑制程序不完全,它就会不断繁殖并逐步取代人类细胞。体细胞杂交虽不常见但也会发生,如人类套细胞淋巴瘤细胞系NCEB-1就携带了小鼠的七条染色体。
异种移植也会导致细胞系交叉污染和错误鉴定,来自异种移植的复苏细胞会被宿主动物细胞所替代。
一般而言,交叉污染最终的结果将会是少量适应细胞完全且快速的替代。两个细胞系不能持续共存于同一个培养环境,除非它们是共生关系,但这种情况据我们所知还未有报道。一个细胞群经过许多次传代后还能包含一个稳定的混合基因组,唯一已知的情况是体细胞杂交。
通过对细胞错误识别和交叉污染长达50年的追踪和研究,STR分型方法已成为对人源细胞和小鼠细胞进行鉴定的标准方法,然而该方法的弊端是不能进行其他物种的鉴定,并无法识别不同物种间的交叉污染。
二、CELL STR ID®细胞种属鉴定及种间交叉污染质控检测原理
我公司CELL STR ID®细胞种属鉴定及种间交叉污染质控检测体系,通过对人、小鼠、大鼠、非洲绿猴、仓鼠、猪、狗、牛、羊等10种种属特异性基因COI进行特异探针序列设计,并进行同时扩增和检测,因每种种属的特异基因片段大小特异,通过判断各自特异性序列是否扩增以及出现的片段大小就可以判断待检样本是否特定种属以及是否有多种种属DNA共存。通过该体系检测只需要单次实验就可以快速判断待检细胞样本是否人源或其它种属DNA或多种属DNA交叉污染。
三、CELL STR ID®细胞种属鉴定及种间交叉污染鉴定委托检测流程
3.1 电话或咨询确认相关信息(价格、样本要求、周期、付款及合同)
3.2 送样检测,填写电子订单发送至:hkgene@126.com
3.3 检测分析、报告整理、结果发送。
四、种属鉴定及种间交叉污染质控检测图谱及参考文献
参考文献:
4.1、 Capes-Davis, A., Theodosopoulos, G., Atkin, I., et al. (2010) Check your cultures! A list of cross-contaminated or misidentified cell lines. Int. J. Cancer 127 (1), 1−8
4.2、Cell Lines as Biological Models: Practical Steps for More Reliable Research
4.3、Cases of Mistaken Identity 2007
4.4、ATCC SDO Workgroup ASN-0002 (2010) Cell line misidentification: the beginning of the end.
五、项目优势:
5.1 快速(送我们检:3-4个工作日,客户自检3-5h).
5.2 对STR鉴定无法确认的待检细胞种属鉴定,可替代同工酶方法。
5.2 通过单反应即可同时检测10个种属的确认(包括人、小鼠、大鼠、仓鼠、非洲绿猴、猪、狗、牛、羊等10个种属)
5.3 提供配套质检方案(仪器、试剂、软件、技术培训),便于用户实现自主可控检测。同一套仪器可实现人源/小鼠细胞STR鉴定、种属鉴定、支原体分型检测、菌种鉴定、端粒酶检测、HLA分型、宿主细胞DNA片段残留及片段大小分析等。
5.4 提供种属鉴定及交叉污染质控项目的其它质控意义数据及相关知识分享,上述质控项目技术培训。
欢迎咨询:158 1120 5095(微信同号)
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文献和实验均应进行鉴别试验,以确认为本细胞,且无其他细胞的交叉污染。 细胞鉴别试验方法有多重,包括细胞形态、生物化学法(如同工酶试验)、免疫学检测(如同工酶试验)、免疫学检测(如组织相容性抗原、种特异性免疫血清)、细胞遗传学检测(如染色体核型、标记染色体检测)、遗传标志检测(如 DNA 指纹图谱,包括短串联重复序列(STR)、限制片段长度多态性(RFLP-PCR)和内含子多态性(EPIC-PCR)法等)以及其他方法(如杂交法、PCR 法、报告基因法等)。应至少选择上述一种或几种方法对细胞进行种属
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