- ¥1156
- 信裕生物/XY-Bioscience
- XY-3118
- 进口/国产
- 2025年07月06日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
生物素随机引物DNA标记试剂盒
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海信裕生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃保存。
- 规格：
10次
生物素随机引物DNA标记试剂盒(Biotin Random Prime DNA Labeling Kit)是一种通过随机引物标记反应产生生物素标记DNA探针的试剂盒。本试剂盒标记的生物素DNA探针可以用于常规的Northern、Southern、colony或plaque hybridization、dot或slot blot、原位杂交等。
在Klenow酶(Klenow fragment,3'-5'exo-)催化下，通过随机引物标记反应(random prime labeling)可以把生物素标记的Biotin-11-dUTP掺入到新合成的DNA探针中，这样就可以产生生物素标记的DNA探针。在随机引物标记反应过程中，一些标记好的DNA探针可以被Klenow酶从模板DNA链上驱赶下来。这样在模板量较少的情况下，通过随机引物标记反应，最后可以产生比模板DNA量更多的生物素标记DNA探针，可多达1-15倍左右。
本试剂盒可以用于多种DNA模板的标记，包括DNA片段、线性化的质粒或cosmid、超螺旋DNA等。用于本试剂盒的模板DNA片段应不小于100bp，小于100bp的DNA模板可以使用信裕生物生产的生物素3'末端DNA标记试剂盒(D3106)进行DNA探针标记。
用于本试剂盒的模板DNA的量应不少于10ng，推荐的模板用量为100ng-1μg。
本试剂盒中提供了已经用生物素标记好的Biotin-Control DNA，可以用作检测生物素DNA探针标记效率的对照。
生物素标记DNA可以使用信裕生物生产的化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒(D3308)或其它适当试剂盒进行检测。
本试剂盒可以用于10个标记反应。
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| XY-3118-1 | Random Primer in Buffer(5X) | 105μl |
| XY-3118-2 | Klenow Fragment | 11μl |
| XY-3118-3 | Biotin-Labeling Mix | 50μl |
| XY-3118-4 | Ultrapure Water | 1ml |
| XY-3118-5 | Biotin-Control DNA(3ng/μl) | 50μl |
| XY-3118-6 | 探针标记终止液 | 100μl |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
需自备用于探针标记效率检测的相关试剂。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. 在一离心管或PCR管内加入100ng-1μg DNA模板，再加入适量试剂盒提供的Ultrapure Water，至总体积为34μl。
说明：通常100-300ng DNA模板已经足够用于一次标记反应。
2. 加入10μl Random Primer in Buffer (5X)，混匀。如有液滴沾在管壁上，高速离心数秒使所有液体集中在管底。
3. 沸水浴加热5分钟，或在PCR仪上100℃加热5分钟(如果不能设置100℃，99℃加热5分钟也完全可以)。
4. 立即放置到预先准备好的冰水浴中至少2-3分钟。
5. 加入5μl Biotin-Labeling Mix。
6. 加入1μl Klenow Fragment，混匀。如有液滴沾在管壁上，高速离心数秒使所有液体集中在管底。
7. 37℃孵育1小时或过夜(不宜超过20小时)。37℃孵育过夜可以显著增加生物素标记DNA的产量，因此推荐孵育过夜(12-20)小时。
8. 加入3μl探针标记终止液，混匀，终止标记反应。至此标记反应已经全部完成，标记好的DNA可以-20℃保存。
9. 此时探针可以直接用于探针标记效率的检测及Southern、Northern等后续操作。
10. 整个探针标记反应的流程参见下表：
| 100ng-1μgDNA模板 | xμl |
| Ultrapure Water | (34-x)μl |
| Random Primer in Buffer (5X) | 10μl |
| 100℃ 5分钟，立即冰浴冷却 | |
| Biotin-Labeling Mix | 5μl |
| Klenow Fragment | 1μl |
| 总体积 | 50μl |
| 37℃孵育过夜 | |
| 探针标记终止液 | 3μl |
| -20℃保存 | |
| 此时可用于标记效率的检测及Southern、Northern等后续检测 | |
11. 探针标记效率的检测：可以对标记好的探针进行适当梯度稀释后，使用信裕生物生产的化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒(D3308)或其它适当的方法进行检测。通常探针的标记效率可以参考下表：
| 模板DNA量 | 生物素标记DNA产量 | |
| － | 孵育1小时 | 孵育20小时 |
| 10ng | 80ng | 900ng |
| 30ng | 150ng | 1350ng |
| 100ng | 350ng | 1650ng |
| 300ng | 750ng | 2200ng |
| 1000ng | 1300ng | 2600ng |
| 3000ng | 1600ng | 2600ng |
注意：具体的探针标记效率还和模板DNA的长度、纯度等因素有关，上表的数值仅供参考。
12. 使用本试剂盒所获得的生物素标记DNA的长度通常在数百bp左右。具体的长度因模板的长度而有所不同。例如模板DNA的长度为1kb，则生物素标记DNA产物的长度通常为100-1000bp，平均长度约为300bp左右。
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文献和实验非常高，一般情况下同位素是首选。如今Atlas SpotLight标记试剂盒特别提供逆转录所需的试剂，可以将2μg以上的mRNA或者50μg以上的RNA样品制备成生物素标记的单链cDNA探针，由于没有竞争性抑制，单链探针的灵敏度要大大高于双链探针。另外生物素标记的探针比32P标记的探针要稳定，可以在半年内多次重复使用。 对于Southern、Northern和多组织Northern预制杂交膜（MTN）、多组织表达矩阵（MTE）等以尼龙膜为基质的杂交、印迹反应，可以选用SpotLight随机引物标记试剂盒
Chemiluminescent Hybridization & Detection Kit），即可组合出完整的非放射性检测分析系统。不过这个系统不适用于玻片基质的芯片的探针标记。 由于Atlas系列的DNA微阵列膜上每个点的核酸量有限，所以对标记探针的灵敏度要求非常高，一般情况下同位素是首选。如今Atlas SpotLight标记试剂盒特别提供逆转录所需的试剂，可以将2μg以上的mRNA或者50μg以上的RNA样品制备成生物素标记的单链cDNA探针，由于没有竞争性抑制，单链探针的灵敏度要大大高于双链探针。另外生物素标记
P标记的脱氧核苷三磷酸，经DNA聚合酶作用掺入DNA。Bio-dUTP代替dTTP,Bio-dATP代替dATP，Bio- dCTP代替dCTP。Bio –11-dUTP的11是指生物素基团与脱氧核苷酸之间连接臂的碳链长度。常用的酶促生物素标记DNA的方法有缺口平移法和随机引物延伸法。 3．寡核苷酸的生物素末端标记 有5’-磷酸的化学标记法和3’-OH的酶促标记法。前者将寡核苷酸的5’-磷酸接上一个乙二胺，然后用琥珀酰亚胺生物素，将生物素基团连接在磷酸酰胺基上。后者是用末端转移将Bio
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