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组织及血液碱性磷酸酶(AKP/ALP)测试盒(微量法)规格

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  • 2025年07月12日
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    • 供应商

      上海研生

    • 保存条件

      低温冷藏

    • 规格

      100管/48样

    实验报告:
    一、组织及血液碱性磷酸酶(AKP/ALP)测试盒(微量法)规格分离与培养:
        1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;
        2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
        3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
        4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
        5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
    二、免疫荧光鉴定:
        1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%在室温条件下固定细胞15min;
        2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
        3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
        4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
        5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
        6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

    产品细节图片1中文名称:组织及血液碱性磷酸酶(AKP/ALP)测试盒(微量法)规格
    英文名称:详见说明书
    产品规格:100管/48样
    发货周期:1~3天
    发货周期:1~3天

    测定意义:
    AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白,在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。AKP/ALP广泛分布于人体各脏器中,以肝脏为主。肝硬化、肝癌、肝炎、佝偻病、软骨病等均可引起AKP/ALP的升高,因此AKP/ALP常用于阻塞性黄疸、原发性肝癌等疾病的检查。
    测定原理:
    在碱性环境中,AKP/ALP催化磷酸苯二钠水解生成游离和磷酸氢二钠,在碱性溶中与4-氨基安替比林作用,经铁化钾氧化生成红色亚醌衍生物,在510nm有特征光吸收。
    需自备的仪器和用品:

    酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移器、酶标板和蒸馏水。
    注意事项:
          尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响,但为取得良好的使用效果,3-6个月内推荐4℃保存,并适当注意避免反复冻融。
          如果有细菌或真菌污染,会严重影响检测效果。
          染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
          如果细胞收集过程中使用了胰酶,需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC,导致染色失败。
          荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
          用于流式细胞仪检测时,如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞,并且通过调整相关设置和参数也无法改善,可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测,这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
          需自备PBS。
          本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
          为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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    培养操作步骤:
    1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布; 
    2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片); 
    3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时; 
    4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中; 
    5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 


     

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