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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
低温保存
- 英文名:
M5 HiPer Ni-Agarose His标签蛋白纯化试剂盒(包涵体蛋白)
- 库存:
137
- 供应商:
上海机纯实业有限公司
- 规格:
5ml
M5 HiPer Ni-Agarose His标签蛋白纯化试剂盒(包涵体蛋白)基本七点注意事项:
1、各种试剂禁忌常年续加
2、质控必须用高、中、低值三个样本每天随患者标本测定
3、抗凝剂的使用
4、校准液的正确使用
5、同一品牌不同批号的试剂不能混用
6、续加试剂后要重新定标,标准液即开即用
7、不同厂家的试剂禁用同一标准液定标
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文献和实验Purification of 6xHis epitope tagged proteins by Ni-NTA-Agarose His标签蛋白纯化
Low (“Low”)Imidazole Buffer 0.5L 100mM Imidizole 3.4g 5% glycerol 25ml 100% glycerol 50mM Tris-HCl (pH 7.9)50ml 0.5M Tris-HCl (pH 7.9) 0.1% Tween-20 0.5M 100% Tween-20 500mM NaCl50ml 5M NaCl dH2O Fill to 0.5L (start w/ 350ml) High (“High
离子浓度、添加剂(如5%甘油、1mM DTT)等。 原因三 His标签没有表达或丢失或暴露不充分。 建议1 用anti-His的抗体进行WB,检测His标签是否存在。 建议2 将蛋白用4-6M盐酸胍或4-8M尿素变性后,让His标签充分暴露出来,看是否能与填料结合。 建议3 改变His标签的位置或者增加其数目(常用6-12个His),增加暴露和结合机会。 建议4 改变金属结合离子,除了Ni2+,Cu2+、Zn2+、Co2+也可以用来进行His标签的捕获。 2、His标签蛋白结合了,但是洗脱不充分 原因
、核蛋白、胞浆蛋白、带化学修饰基团的天然蛋白(例如磷酸化蛋白)中的一种或两种以上作为目标从样品中分离收集的一套试剂。用于液体样品中蛋白浓缩、提取、或脱盐、脱去垢剂、脱还原剂等目的。 蛋白纯化试剂盒用于将连接有Flag标签 GST HIS 标签的重组 蛋白、包涵体蛋白、抗体从重组蛋白表达系统中高效浓缩分离出来。主要原理是利用蛋白A或蛋白G与抗体的不变区有多个结合位点或Ni-Sepharose与HIS标签蛋白在不同缓冲液条件下亲和能力多得多差异分离目标蛋白。将蛋白A与Sepharose共价
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