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低温保存
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M5 HiPure Matrigel 基质胶
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43
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上海机纯实业有限公司
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1ml
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文献和实验Transwell侵袭实验怎么做?从基质胶铺板、接种条件到结果计数!
二、基质胶铺板:最容易翻车的核心步骤 1. 解冻方法与耗材预冷 Matrigel对温度非常敏感,在4 ℃下仍保持流动性,温度超过约10 ℃后会逐渐开始聚合。因此从解冻到稀释、铺板,都应尽量保持低温。 解冻方法:提前一晚将基质胶放在冰上,于2~8 ℃环境缓慢解冻。完全融化后轻轻混匀,再分装成单次使用量,减少反复冻融。 耗材预冷:枪头、EP管、储液槽以及Transwell小室等凡是会接触胶液的耗材,都建议提前预冷。稀释和加样过程中持续将基质胶放在冰上,避免胶液在枪头或管壁中提前聚合
类器官接种后迟迟不长、形态越来越扁、胶滴塌掉、传代后大量死亡,很多时候不只是培养基的问题,基质胶本身也值得排查。 类器官需要三维基质提供附着和机械支撑。常用的 Matrigel、BME、Geltrex 都属于基底膜提取物,含 Laminin、Collagen IV 等基质成分,但不同产品、浓度和批次的蛋白组成及力学性质并不完全一致。基质选错或操作不稳定,会直接影响类器官形成、出芽、分化和批间重复性。 一、Matrigel、BME、Geltrex怎么选? 常规肠道、胃、肝脏
ng/ml) 和 EGF (终浓度100ng/ml),用移液器吹打混匀,配制成肠基质胶。 13、将球状体滴加在预冷的肠基质胶中,并将样品混匀,总体积将达到 75μl (50μl 基质胶+ 25μl 培养基+球状体)。 14、将混合物接种在 4 孔板中,注意需接种在孔的中心,避免接触侧壁。 15、将 4 孔板放入 37℃,5%CO2 的培养箱中孵育 10min,使 Matrigel 固化。 16、向每个孔中缓慢滴加 5ml 肠道生长培养基,确保基质胶被完全覆盖。 17、每隔 4 天,或当培养基中的
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