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文献和实验、S、G2 和 M 期。 (A) FUCCI(CA) 探针示意图。 (B) 基于 Cdt1(mCherry 通道)和联会蛋白(YFP 通道)表达水平的 G1、S、G2 和 M 期持续追踪的示例。 然而,在细胞分化过程中监控细胞周期动力学在成像和数据分析两方面都面临挑战。 长时间活细胞成像需要稳定的温度和二氧化碳控制,通过柔和的光照尽量降低光毒性,并通过可靠的自动聚焦确保在整个时间序列采集过程中获得优质图像。 对分析而言,最大的挑战是在于 ESC 分化过程中运动、分裂并显著改变其形状
光显微镜下几乎无信号的低丰度表达基因 Sox2、Tet1、Sall4、Tbx3 等(图 2b)。 图 2:(a)示意图显示 P2A-mcherry 和 SPH-OminiCMV-Ents 两种标记基因的策略。 (b)在 mESC 细胞中用 SPH-OminiCMV-Ents 策略(红色三角形)和 P2A- mCherry 策略(绿色菱形)标记不同的基因,统计其 mCherry 荧光信号强度以及用 qPCR 分析这些基因的表达水平(紫色圆圈,紫色 y 轴)。 为探讨增加 sgRNA 拷贝数是否会
Quantitative Visualization of Autophagy Induction by mTOR Inhibitors
induction by mTOR inhibitors, we use an mCherry-GFP-LC3 reporter which is amenable to retroviral delivery into mammalian cells, stable expression, and analysis by fluorescence microscopy. Here, we describe our imaging protocol and image recognition algorithm
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