相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
54
- 英文名:
adenovirus expressing mCherry-GFP-LC3B fusion protein
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海一研
- 保存条件:
低温
- 规格:
1ml|10×1ml
英文名称:adenovirus expressing mCherry-GFP-LC3B fusion protein
产品规格:1ml|10×1ml
发货周期:1~3天
本品是一种可以表达mCherry-GFP-LC3B融合蛋白的腺病毒,可以用于感染细胞或组织后进行细胞自噬的检测。
LC3是酵母自噬关键蛋白ATG8在哺乳动物中的同源蛋白。LC3最初被分析鉴定为microtubule-associated protein 1 light chain 3。LC3蛋白家族包括LC3A、B、C和GABARAP等亚家族,其中对于LC3B的研究最为广泛。到目前为止,LC3B被认为是细胞自噬信号通路最为关键的标志性蛋白。LC3B是一个具有125个氨基酸残基的蛋白,在蛋白合成后,被Atg4所酶切而失去了C端的22个氨基酸蛋白,从而暴露出C端的甘氨酸,人们把它命名为胞质形式的LC3B I。在细胞自噬的过程中,其C端暴露的甘氨酸经过一个类似泛素化的过程,以ATG7为E1样激活酶, 以ATG3为E2样连接酶,以Atg12-Atg5-Atg16复合物为E3样连接酶,在C端甘氨酸上共价连接上磷脂酰乙(phosphatidylethanolamine,PE)而成为LC3B-PE即LC3B II。与胞质定位的LC3B I不同,LC3B II定位于自噬体的内膜和外膜上。在自噬体与溶酶体融合后,自噬体外膜上的LC3B II被Atg4所酶切,而自噬体内膜上的LC3B II则被溶酶体内的蛋白酶所降解。尽管LC3B II比LC3B I的分子量要大,但由于其极强的疏水性,在SDS-PAGE电泳时,LC3B II比LC3B I迁移得更快,其表观分子量分别为14kD和16kD。在用GFP-LC3B腺病毒感染细胞后,在非自噬的情况下,荧光显微镜下GFP-LC3B以弥散的形式存在于细胞质中;而在自噬的情况下,荧光显微镜下GFP-LC3B则聚集在自噬体膜上,以斑点的形式表现出来。
自噬是一种在进化上高度保守的通过溶酶体吞噬并降解部分自身组分的细胞内分解代谢途径。自噬与多种生理功能有关,在饥饿等不利的环境条件下, 细胞通过自噬降解多余或异常的细胞内组分,为细胞的生存提供能量及原材料,促进生物体的生长发育、细胞分化及对环境变化产生应答。自噬异常与多种病理过程如肿瘤、神经退行性疾病、代谢疾病、病原体感染等都有密切关系。由于细胞自噬在生理和病理过程中都有重要作用,自噬已经成为细胞生物学领域的一个新的研究热点。
Ad-mCherry-GFP-LC3B是的重组腺病毒,感染后能够在靶细胞中有效表达红色荧光蛋白mCherry、绿色荧光蛋白(GFP)和LC3B的融合蛋白,呈现明亮的红色和绿色荧光,可以用于细胞自噬的检测。
自噬小体在与溶酶体融合过程中,溶酶体内的酸性环境会导致GFP荧光淬灭,这为追踪GFP-LC3B的细胞定位增加了难度。mCherry是一种来自于蘑菇珊瑚(mushroom coral)的单体红色荧光蛋白,当其与GFP进行LC3B的共同标记时,在GFP被溶酶体酸性环境所淬灭的情况下,可以发出红色荧光的mCherry因为其卓越的稳定性而被保留。因此,通过融合表达mCherry-GFP-LC3B蛋白,可以非常有效地追踪自噬过程。在用Ad-mCherry-GFP-LC3B腺病毒感染细胞后,在非自噬的情况下,荧光显微镜下mCherry-GFP-LC3B以弥散的黄色荧光(mCherry和GFP的综合效果)形式存在于细胞质中;而在自噬的情况下,荧光显微镜下mCherry-GFP-LC3B则聚集在自噬体膜上,以黄色斑点的形式表现出来(LC3B dot or punctae);当自噬体与溶酶体融合后,因GFP荧光的部分淬灭而以红色斑点的形式表现出来。
腺病毒感染细胞后为瞬时表达,通常不会与基因组DNA重组,不能用于筛选稳定细胞株。本产品感染体内外细胞后,有效表达时间通常不少于7天,不同细胞和组织的有效表达时间有所不同。感染10-14天后融合蛋白的表达很可能会大大减弱。
本产品可以在表达E1的HEK293A、HEK293等适当细胞中扩增。
本产品的滴度≥1×108 pfu/ml,使用时可以按照108pfu/ml进行计算。如果按照20 MOI感染6孔板的细胞,每孔50万细胞计算,共可以感染10个孔;如果按照20 MOI感染24孔板的细胞,每孔10万细胞计算,共可以感染50个孔。如果MOI值提高,则相应可以感染的孔数会减少;如果MOI值降低,则相应可以感染的孔数会增加。
储存条件:-20℃,有效期1~2个月。
Ad-mCherry-GFP-LC3B使用注意事项
1. 微量试剂取用前请离心集液。
2. Annexin V-EGFP,Propidium Iodide(PI)避光保存及使用。
3. Propidium Iodide (PI)有毒,操作时请戴手套。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,需用不含EDTA的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA的PBS中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
使用说明
1. 细胞的增殖和细胞毒实验,一般可在96孔细胞培养板中进行。
2. 每孔加入100微升细胞悬液。细胞的数量取决于实验目的和培养时间。增殖实验每孔通常加入103个以上数量的细胞;细胞毒性实验每孔至少加入5x103个或以上数量的细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等因素确定)。
3. 接种的细胞按照实验需要,送入细胞培养箱进行培养。增殖实验通常要给予0-10微升特定的药物或生长因子进行刺激。细胞毒实验通常要给予0-10微升抑制因子或细胞毒药物;
4.培养结束后,每孔加入20微升MTT溶液,在细胞培养箱内继续孵育3-6小时;
5.孵育结束后,每孔加入100微升Formanzan溶解液,在37℃细胞培养箱内再继续孵育,直至在镜下观察formazan全部溶解。通常37℃孵育4小时左右,紫色结晶会全部溶解。如果紫色结晶较小较少,溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大较多,溶解的时间会略长。
6. 在570nm测定吸光度。如无570nm滤光片, 560-600nm范围的滤光片均可使用。
凋亡抑制因子5抗体英文全称HBV preSAb英文简称HBV preSAb检测范围610nmol/L-200IU/L
丁酰基辅酶A合成酶3抗体英文全称HBV-DNA英文简称HBV-DNA检测范围611nmol/L-8000pg/mL
脂肪细胞源性亮氨酸氨基肽酶抗体(血管内皮细胞生长因子诱导蛋白)英文全称heterogeneous nuclear ribonucleoprotein compies;anti-RA33-antibody英文简称hnRNP;RA33检测范围612nmol/L-160U/L
线粒体凋亡诱导因子2抗体英文全称Ras-responsive element-binding protein 1英文简称RREB-1检测范围613nmol/L-8ng/mL
腺苷单磷酸脱氨酶1抗体英文全称free chorionic gonadotropin英文简称f-βhCG检测范围614nmol/L-80mIU/mL
红细胞蛋白Ank1抗体英文全称Pokemo英文简称Pokemo检测范围615nmol/L-80ng/mL
腺苷酸琥珀酸裂解酶抗体英文全称Protocadherin-18英文简称PCDH18检测范围616nmol/L-160pg/mL
α1B糖蛋白抗体英文全称Pregnanediol英文简称Pregnanediol检测范围617nmol/L-16μmol/24h
载脂蛋白B-mRNA编码蛋白抗体英文全称progesterone induced blocking factor英文简称PIBF检测范围618nmol/L-16ng/mL
凋亡诱导因子3抗体英文全称apoprotein J英文简称apo-J检测范围619nmol/L-200μg/mL
凋亡蛋白活性因子1相互作用蛋白抗体英文全称Mucin 17英文简称MUC17检测范围620nmol/L-8ng/mL
凋亡诱导蛋白D抗体英文全称Mucin 7英文简称MUC7检测范围621nmol/L-64U/mL
酸性神经鞘磷脂酶抗体英文全称true insulin英文简称TI检测范围622nmol/L-96pmol/L
腺嘌呤核苷酸转运蛋白1抗体英文全称Bone sialoprotein 2英文简称IBSP检测范围623nmol/L-240ng/mL
肌萎缩侧索硬化2染色体区域候选蛋白8抗体英文全称Lipoarabinomannan英文简称LAM检测范围624nmol/L-8ng/mL
M9CA肉汤250克M9CA BrothBR
M63肉汤250克M63 BrothBR
F-12营养混合物10升F-12 Nutrient Mixture含L-谷氨酰胺,不含NaHCO3
500毫升不含谷氨酰胺
500毫升含谷氨酰胺
DMEM/F12培养基10升F-12(DMEM)BR
Ad-mCherry-GFP-LC3BHerba ephedrae麻黄PCR鉴定试剂盒 中文名称 膜粘连蛋白2受体抗体别 名 Annexin 2 receptor; Annexin II receptor; AX2R; AXIIR; C5orf39; Chromosome 5 open reading frame 39; AX2R_HUMAN.研究领域 细胞生物 细胞凋亡 细胞膜受体 细胞膜蛋白蛋白分子量 predicted molecular weight: 22kDa性 状 Lyophilized or Liquid免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human AX2R/LOC389289/ANXA2R
Radix ephedrae麻黄根PCR鉴定试剂盒 中文名称 α2C-AR肾素能受体抗体别 名 Adra 2c; Adra 2c; ADRA2C; ADRA2C; ADRA2L2; ADRA2L2; ADRA2RL2; ADRA2RL2; ADRARL2; ADRARL2; Adrenergic alpha 2C receptor; Adrenoceptor alpha 2C; Alpha 2C adrenergic receptor; Alpha 2C adrenergic receptor subtype C4; Alpha 2C adrenoceptor; Alpha 2C adrenoreceptor; Alpha 2CAR; alpha2 AR C4; alpha2 AR C4; alpha2 C4; alpha2 C4; alpha2C; alpha2C; ALPHA2CAR; alpha2cii-adrenergic receptor; Subtype alpha2 C4; Subtype alpha2 C4; ADA2C_HUMAN.研究领域 神经生物学 信号转导 生长因子和激素 细胞膜受体 G蛋白偶联受体 G蛋白信号蛋白分子量 predicted molecular weight: 49kDa性 状 Lyophilized or Liquid免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human ADRA2C/alpha 2C Adrenergic Receptor
Semen strychni马钱子PCR鉴定试剂盒 中文名称 中心体蛋白AZI1抗体别 名 5 azacytidine induced 1; 5-azacytidine induced 1; 5-azacytidine-induced protein 1; AZ1; Azi; Azi1; AZI1_HUMAN; Centrosomal protein 131 kDa; Centrosomal protein of 131 kDa; Centrosomal protein of 131 kDa; Cep131; Cep131; KIAA1118; OTTMUSP00000004498; Pre-acrosome localization protein 1; RP23 37J21.1.研究领域 细胞生物 细胞类型标志物蛋白分子量 predicted molecular weight: 122kDa性 状 Lyophilized or Liquid免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human AZI1
Radix ophiopogonis麦冬PCR鉴定试剂盒 中文名称 ADCK5蛋白抗体别 名 ADCK 5; aarF domain containing protein kinase 5; ADCK-5; ADCK5; ADCK5_HUMAN; Uncharacterized aarF domain containing protein kinase 5; Uncharacterized aarF domain-containing protein kinase 5,研究领域 细胞生物 免疫学蛋白分子量 predicted molecular weight: 66kDa性 状 Lyophilized or Liquid免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human ADCK5
Fructus hordei germinatus麦芽PCR鉴定试剂盒 中文名称 细胞分裂周期蛋白5抗体别 名 ANAPC 5; ANAPC5; Anaphase promoting complex subunit 5; Anaphase-promoting complex subunit 5; Apc 5; APC5; APC5_HUMAN; Cyclosome subunit 5; PDL 108; PDL108; Periodontal ligament fibroblast protein; RMC1.研究领域 细胞生物 细胞周期蛋白 细胞分化蛋白分子量 predicted molecular weight: 85kDa性 状 Lyophilized or Liquid免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human APC5
风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验Approximately 5% of the world’s population has been infected with hepatitis B virus (HBV). Ten percent of these adults will become chronic carriers, as will 95% of the infants infected perinatally. Those that do become chronically infected
、S、G2 和 M 期。 (A) FUCCI(CA) 探针示意图。 (B) 基于 Cdt1(mCherry 通道)和联会蛋白(YFP 通道)表达水平的 G1、S、G2 和 M 期持续追踪的示例。 然而,在细胞分化过程中监控细胞周期动力学在成像和数据分析两方面都面临挑战。 长时间活细胞成像需要稳定的温度和二氧化碳控制,通过柔和的光照尽量降低光毒性,并通过可靠的自动聚焦确保在整个时间序列采集过程中获得优质图像。 对分析而言,最大的挑战是在于 ESC 分化过程中运动、分裂并显著改变其形状
光显微镜下几乎无信号的低丰度表达基因 Sox2、Tet1、Sall4、Tbx3 等(图 2b)。 图 2:(a)示意图显示 P2A-mcherry 和 SPH-OminiCMV-Ents 两种标记基因的策略。 (b)在 mESC 细胞中用 SPH-OminiCMV-Ents 策略(红色三角形)和 P2A- mCherry 策略(绿色菱形)标记不同的基因,统计其 mCherry 荧光信号强度以及用 qPCR 分析这些基因的表达水平(紫色圆圈,紫色 y 轴)。 为探讨增加 sgRNA 拷贝数是否会
技术资料暂无技术资料 索取技术资料









