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大鼠胚胎外胚层发育蛋白(EED)ELISA检测试剂盒

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    • 供应商：

      西格

    • 样本：

      血清、血浆或其他相关生物液体

    • 规格：

      48T/96T

    主要组成成分：试剂      性状：液体      产品规格：96T/48T      96T指可以做94个标本，2个标准对照      48T指可以做47个标本，1个标准对照      96T-84个样本      48T-42个样本      待检样本：体液，血清，血浆，细胞培养上清液，尿液，组织匀浆,心房水标本等等。  ELISA 试验时，注意事项如下：       1. 正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。       2. 在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:       （1） 固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。       （2） 包被抗体（或抗原）的选择：将抗体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18～24小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg／ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg／ml。       （3） 酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶标记抗体部份）。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度）在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。       （4） 酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入 。 样品收集、处理及保存方法 1）血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2）血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。 3）细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4）组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液 5）保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 注意事项 1）试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 2）实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 3）不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 4）使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。 5）使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 6）洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 7）底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。 8）加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。 9）按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

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