胖大海探针法PCR鉴定试剂盒说明书

产品名称：胖大海探针法PCR鉴定试剂盒说明书
英文名称：Semen sterculiae lychnophorae
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年

产品特点：
本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。
储存条件：
14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括绝对定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的绝对定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
硬脂酸胆酯(>98%,BR)  Cholesteryl stearate  质量规格：>98%,BR 小鼠血小板因子3(PF-3)ELISA检测试剂盒Mouseplateletfactor3,PF3ELISAKit 96T/48T
重胆碱(>98%,BR)  Choline bitartrate  质量规格：>98%,BR 人二羟基赖正己氨酸(DHLNL)试剂盒 Hurman dihydroxylysinonorleucine,DHLNL ELISA kit
铬粒(>99%，BR)  Chromium granular  质量规格：>99%,BR RatmajorhistocompatibilitycomplexⅠ,MHCⅠ/AgBⅠ/H-1ⅠELISAKit大鼠主要组织相容性复合体Ⅰ类(MHCⅠ/AgBⅠ/H-1Ⅰ)ELISA试剂盒规格：96T/48T
铬粉(>99%，BR)  Chromium powder  质量规格：>99%,BR DH5α钙转感受态细菌10X200微升
氯化铬六水(>98%,BR)  Chromium(III) chloride, hexahydrate  质量规格：>98%,BR Mouseoxidizidedglathione,GSGSELISA试剂盒小鼠氧化型谷胱甘肽(GSGS)ELISA试剂盒规格：96T/48T
硫酸钾铬十二水  Chromium(III) potassium sulfate, dodecahydrate  质量规格：>98%,BR 小鼠内皮型合成酶(eNOS)ELISA试剂盒 ，英文名： eNOS ELISA Kit
硫酸铬(>98%,BR)  Chromium(III) sulfate, hydrate  质量规格：>98%,BR 小鼠热休克因子1(HSF1)ELISA检测试剂盒MouseHeatShockFactor1,HSF1ELISAKit 96T/48T
酸性红B  Chromotrope FB  质量规格：>60%,BS 人二0酸腺苷(ADP)试剂盒 Human adenosine diphosphate,ADP ELISA kit
直接黄12  Chrysophenine  质量规格：>70%,BS RatmajorhistocompatibilitycomplexⅡ,MHCⅡ/AgBⅡ/H-1ⅡELISAKit大鼠主要组织相容性复合体Ⅱ类(MHCⅡ/AgBⅡ/H-1Ⅱ)ELISA试剂盒规格：96T/48T
肉桂酰胺(>98%，BR)  Cinnamamide  质量规格：>98%，BR DH5α细菌1毫升
胖大海探针法PCR鉴定试剂盒说明书苦味素 HPLC≥98% 20mg ELISAKitHbH人血红蛋白H规格：48T/96T
苦杏仁苷 HPLC≥98% 20mg ELISAKitHBsAg人乙型肝炎表面抗原规格：48T/96T
苦玄参苷IA HPLC≥98% 20mg ELISAKitHBVpreS2Ab人乙型肝炎病毒前S2抗体规格：48T/96T
苦玄参苷IB HPLC≥98% 20mg ELISAKitHBVpreS2Ag人乙型肝炎病毒前S2抗原规格：48T/96T
款冬酮 HPLC≥98% 20mg ELISAKitHBxAg人乙型肝炎病毒X抗原规格：48T/96T
奎宁 HPLC≥98% 20mg ELISAKitHBxAg人乙型肝炎病毒X抗原规格：48T/96T
喹乙醇 HPLC≥98% 20mg ELISAKitHBXIP人乙型肝炎病毒X蛋白结合蛋白规格：48T/96T
辣椒碱（天然） HPLC≥98% 20mg ELISAKitHBXIP人乙型肝炎病毒X蛋白相互作用蛋白规格：48T/96T
莱苞迪甙A HPLC≥98% 20mg ELISAKitHB-β人血红蛋白β亚基规格：48T/96T
莱苞迪甙C HPLC≥98% 10mg ELISAKitHD人组织蛋白去乙酰化酶规格：48T/96T
HbH人血红蛋白H规格：48T/96T 苦味素 HPLC≥98% 20mg
HBsAg人乙型肝炎表面抗原规格：48T/96T 苦杏仁苷 HPLC≥98% 20mg
HBVpreS2Ab人乙型肝炎病毒前S2抗体规格：48T/96T 苦玄参苷IA HPLC≥98% 20mg
HBVpreS2Ag人乙型肝炎病毒前S2抗原规格：48T/96T 苦玄参苷IB HPLC≥98% 20mg
HBxAg人乙型肝炎病毒X抗原规格：48T/96T 款冬酮 HPLC≥98% 20mg
HBxAg人乙型肝炎病毒X抗原规格：48T/96T 奎宁 HPLC≥98% 20mg
HBXIP人乙型肝炎病毒X蛋白结合蛋白规格：48T/96T 喹乙醇 HPLC≥98% 20mg
HBXIP人乙型肝炎病毒X蛋白相互作用蛋白规格：48T/96T 辣椒碱（天然） HPLC≥98% 20mg
HB-β人血红蛋白β亚基规格：48T/96T 莱苞迪甙A HPLC≥98% 20mg
HD人组织蛋白去乙酰化酶规格：48T/96T 莱苞迪甙C HPLC≥98% 10mg
PCR反应的特异性决定因素为：
①引物与模板DNA特异正确的结合；
②碱基配对原则；
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。