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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
60
- 英文名:
Flos campsis
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海博湖
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
50T
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
产品名称:凌霄花探针法PCR鉴定试剂盒说明书
英文名称:Flos campsis
产品规格:50T
产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
产品特点:
本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。
储存条件:
14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三钙(>98%,BR) Calcium phosphate, tribasic 质量规格:>98%,BR ELISAKitBT苏云金芽孢杆菌蛋白规格:48T/96T
DL-硒代蛋氨酸(USP) DL-Selenomethionine 质量规格:>98%(HPLC),USP 小鼠凝血因子Ⅷ相关抗原(FⅧ-Ag)ELISA试剂盒 ,英文名: FⅧ-Ag ELISA Kit
蜜二糖 Melibiose 质量规格:>98%,水合物 小鼠干扰素诱导蛋白10(IP-10/CXCL10)ELISA检测试剂盒Mouseierferon-inducibleprotein10,IP-10ELISAKit 96T/48T
草酸钠(>98%,BC) Sodium oxalate 质量规格:>98%,BC 人肺癌标志物DR-70(DR-70TM)试剂盒 Human tumor marker DR-70 for lung cancer,DR-70TM ELISA Kit
钨酸钠二水(>98%,BR) Sodium tungstate, dehydrate 质量规格:>98%,BR Ratlipoproteinlipase,LPLELISAKit大鼠脂蛋白脂酶(LPL)ELISA试剂盒规格:96T/48T
丁二酸酐(>98%,BR) Succinic anhydride 质量规格:>98%,BR Cy3标记二抗(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微升
吐温60 Tween-60 质量规格:BR MouseneuropeptideY,NP-YELISA试剂盒小鼠神经肽Y(NP-Y)ELISA试剂盒规格:96T/48T
酵母多糖 A(>98% (HPLC),BC) Zymosan A from Saccharomyces cerevisiae 质量规格:>98% (HPLC),BC 小鼠凝血因子Ⅷ(FⅧ)ELISA试剂盒 ,英文名: FⅧ ELISA Kit
硫酸钙(>99%,BR) Calcium sulfate, anhydrous 质量规格:>99%,BR 小鼠心肌转录因子GATA4ELISA检测试剂盒Mousecardiacanscriptionfactor-GATA4ELISAKit 96T/48T
二环己基碳二亚胺(>99%,BR) DCC, Dicyclohexylcarbodiimide 质量规格:>99%,BR 人腓骨蛋白2(FBLN2)试剂盒 Human Fibulin-2,FBLN2 ELISA kit
凌霄花探针法PCR鉴定试剂盒说明书钌标准溶液(1000μg/ml,介质:2.0mol/L HCl) Ruthenium solution 质量规格:1000μg/ml,介质:2.0mol/L HCl 牛唾液酸(SA)试剂盒 Bovine Sialic Acid,SA ELISA Kit
铑标准溶液(1000μg/ml,溶剂:2.0Mol/L HCl) Rhodium solution 质量规格:1000μg/ml,溶剂:2.0Mol/L HCl 牛维生素A(VA)试剂盒 Bovine Vitamin A,VA ELISA Kit
铼标准溶液(1000μg/ml;溶剂:1.5mol/L硝酸) Rhenium standard 质量规格:1000μg/ml;溶剂:1.5mol/L硝酸 牛维生素B12(VB12)试剂盒 Bovine Vitamin B12,VB12 ELISA Kit
二氧化硅标准溶液(1000μg/ml,介质:0.05mol/L NaOH) Silicon dioxide solution 质量规格:1000μg/ml,介质:0.05mol/L NaOH 牛维生素C(VC)试剂盒 Bovine vitamin C,VC ELISA Kit
银标准溶液(1000μg/ml) Silver standard 质量规格:1000μg/ml 牛维生素D(VD)试剂盒 Bovine Vitamin D,VD ELISA Kit
银标准溶液(100µg/mL,基体:1%HNO3) Silver standard 质量规格:100µg/mL,基体:1%HNO3 牛细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)试剂盒 Bovine cytokeratin fragme aigen 21-1,CYFRA21-1 ELISA Kit
钪标准溶液(1000µg/mL,基体:10%HCL) Scandium standard 质量规格:1000µg/mL,基体:10%HCL 牛细胞色素b-245重链(CYBB)试剂盒 Bovine Cytochrome b-245 heavy chain,CYBB ELISA kit
钐标准溶液(1000μg/ml) Samarium standard 质量规格:1000μg/ml 牛纤连蛋白(FN)试剂盒 Bovine Fibronectin,FN ELISA Kit
锡标准溶液(1000μg/ml) Tin standard 质量规格:1000μg/ml 牛纤调蛋白(FMOD)试剂盒 Bovine fibromodulin,FMOD ELISA Kit
锡标准溶液(100μg/mL,基体: 10%HCl) Tin standard 质量规格:100μg/mL,基体: 10%HCl 牛纤维蛋白原(Fb)试剂盒 Bovine Fibrinogen,Fb Elisa Kit
牛褪黑素(MT)试剂盒 Bovine melatonin,MT ELISA Kit 镨标准溶液(1000μg/ml) Praseodymium standard 质量规格:1000μg/ml
牛唾液酸(SA)试剂盒 Bovine Sialic Acid,SA ELISA Kit 钌标准溶液(1000μg/ml,介质:2.0mol/L HCl) Ruthenium solution 质量规格:1000μg/ml,介质:2.0mol/L HCl
牛维生素A(VA)试剂盒 Bovine Vitamin A,VA ELISA Kit 铑标准溶液(1000μg/ml,溶剂:2.0Mol/L HCl) Rhodium solution 质量规格:1000μg/ml,溶剂:2.0Mol/L HCl
牛维生素B12(VB12)试剂盒 Bovine Vitamin B12,VB12 ELISA Kit 铼标准溶液(1000μg/ml;溶剂:1.5mol/L硝酸) Rhenium standard 质量规格:1000μg/ml;溶剂:1.5mol/L硝酸
牛维生素C(VC)试剂盒 Bovine vitamin C,VC ELISA Kit 二氧化硅标准溶液(1000μg/ml,介质:0.05mol/L NaOH) Silicon dioxide solution 质量规格:1000μg/ml,介质:0.05mol/L NaOH
牛维生素D(VD)试剂盒 Bovine Vitamin D,VD ELISA Kit 银标准溶液(1000μg/ml) Silver standard 质量规格:1000μg/ml
牛细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)试剂盒 Bovine cytokeratin fragme aigen 21-1,CYFRA21-1 ELISA Kit 银标准溶液(100µg/mL,基体:1%HNO3) Silver standard 质量规格:100µg/mL,基体:1%HNO3
牛细胞色素b-245重链(CYBB)试剂盒 Bovine Cytochrome b-245 heavy chain,CYBB ELISA kit 钪标准溶液(1000µg/mL,基体:10%HCL) Scandium standard 质量规格:1000µg/mL,基体:10%HCL
牛纤连蛋白(FN)试剂盒 Bovine Fibronectin,FN ELISA Kit 钐标准溶液(1000μg/ml) Samarium standard 质量规格:1000μg/ml
牛纤调蛋白(FMOD)试剂盒 Bovine fibromodulin,FMOD ELISA Kit 锡标准溶液(1000μg/ml) Tin standard 质量规格:1000μg/ml
实验注意事项:
1)RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料,不同的样本有不同要求,实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况;
2)客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号;
3)客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4)样本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类,探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加,非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量(包括绝对定量和相对定量)和定性分析。
主要服务:DNA或RNA的绝对定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术:引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
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文献和实验这两个条件我们才可以选择快速反应模式。而 Standard Mode 和 Fast Mode 的主要区别在于不同模式下仪器升降温速率不同,快速模式下升降温速度更快。下图列举了当前部分用于基因表达和基因分型的 Master Mix 所支持的反应模式,供大家参考(图 4)。另外针对当前使用较为广泛的体外诊断试剂盒,如新冠检测试剂盒,大家在运行模式选择时需要根据试剂盒说明书做相应的设置,保证实验设置与试剂盒说明书一致。 图 4 常见基因表达和基因分型 master mix 支持反应模式整理
如果您的样本是组织,取样的过程非常重要。组织内部是有内源性 RNase 存在的,组织离体后内源性 RNase 则开始发挥作用,RNA 产生降解。所以离体的组织必须立马放在液氮中速冻,之后转移至 -80℃ 长期保存,且避免反复冻融。研磨组织的过程中需要保证在液氮环境中研磨。RNA 提取的过程中,保证样本的上样量不超过提取试剂盒说明书中规定的最大上样量,上样量过多,同样会造成 RNA 降解。 ②如果您的样本是细胞,则样本搜集过程要简单的多了,只要保证细胞状态良好(细胞状态差也容易造成提取的 RNA 降解
或存放不当:质粒提取试剂盒成分复杂且保存条件不同,有的试剂还容易出现浑浊。在使用之前需要检查试剂是否保存得当,如果出现浑浊,可参考试剂盒说明书,进行 37℃ 温浴至溶液澄清,再冷却至室温使用。 ⑦洗脱液体积不合适:洗脱液使用体积过大会导致提取浓度偏低,过小会导致洗脱不充分,产量过低。建议参考试剂盒说明书来确定洗脱体积,如果洗脱浓度偏低,可以重复洗脱一次; ⑧洗脱液未添加到硅胶膜中心:可能会导致洗脱液覆盖不完全,导致洗脱效率降低。此外洗脱液可以使用碱性洗脱缓冲液或者无核酸酶的水,避免使用 PH<
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