胞内钠离子荧光探针(≥90%(HPLC))

特别提示：包括胞内钠离子荧光探针在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：胞内钠离子荧光探针
产品货号：KM0024
产品规格：2×50μg|5×50μg|10×50μg

本制品是一种具细胞膜渗透性的新型钠离子（Na+）荧光探针。一旦进入细胞后，经非特异性酯酶水解生成水溶性形式的探针。不同于传统Na+探针SBFI，本制品是一种可见光光谱范围的探针，激发波长范围是488-525nm，发射波长是545nm。

本制品具有容易加载、缓慢泄露、良好光稳定性和宽动力学范围等理想特征，也正好弥补传统Na+荧光探针SBFI AM（#KM0048）的缺陷。

分子式：C53H60Cl2N2O18
分子量：1084g/mol
纯度：≥90%（HPLC）
最大激发波长：525 ± 3 nm（Methanol）
最大发射波长：545 ± 3 nm（Methanol）
解离常数（Kd）：20mM（in the absence of K+）
动力学范围（Fmax/Fmin）：29
溶解性：DMSO
保存：-20oC避光干燥保存，至少1年有效。

常用操作流程（AM荧光探针）
以下步骤仅做参考，具体请根据实际情况或参考文献资料来调整。

1．使用无水DMSO溶解本制品（MW:1084g/mol）配制成1-5mM储存液，比如往50μg本制品冻干粉内加入23μlDMSO，充分溶解后配制成2mM储存液。-20oC分装干燥冻存，避免反复冻融。
2．通常在含适当浓度AM探针的无血清培养基中实现探针加载。建议正式实验前向加载培养基内加入Pluronic F-127以促进AM探针的分散。可用DMSO配置20%Pluronic F-127储存液或其他浓度，只需在正式实验前将其与本制品储存液混合，然后加入加载培养基，保证其终浓度＜0.1%（w/v）。
3．室温或37℃孵育细胞（可能在室温的探针加载质量会高些），孵育浓度通常为1-10μM，孵育时间通常为30-60min，具体的请根据实际情况或参考文献资料。
4．（可选）对于大分子量AM探针（分子量≥1000g/mol），孵育结束，加入不含AM探针的细胞加载培养基额外孵育20-60min，以确保细胞将AM基团完全去酯化。
5．用不含血清和探针的培养基清洗细胞至少一次，以降低细胞外背景荧光。
6．最后用合适的仪器来检测荧光信号。检测用最大激发波长525nm，最大发射波长545nm。

注意：
a．如果细胞加载培养基是以碳酸氢钠为缓冲体系，那么加载需要含5%CO2的环境内进行，以防止因CO2损失引起的培养基碱化。
b．如果细胞加载培养基含血清，那需适当提高AM探针工作浓度，以补偿因AM探针与血清蛋白结合引起的损失。
c．某些情况下，对分子量接近或超过1000的AM探针，需用不含AM探针的细胞加载缓冲液进一步孵育20-60min，以保证细胞内酯酶能充分降解AM基团。
d．探针的加载时间和浓度因具体的细胞类型而有差异，请根据具体的细胞类型来优化。
e．对每一种探针有必要通过校准来得到实际解离常数（Kd）。物理条件如温度，pH，离子强度或溶液粘度，以及探针与细胞组成成分如蛋白质的相互作用，都会影响Kd值。实际情况细胞内的Kd比体外溶液通常要高。因此，细胞水平研究有必要进行校准确认实际Kd值。
f．对于本制品，虽然最大激发波长在525nm，但其极强的荧光亮度使其能够用标准的488nm滤片来激发，与Fluo系列的可见光钙离子指示探针检测手段一致。值得注意的是，488nm激发下得到的荧光强度约为最大激发波长下的40%。

注意事项：
1．本制品易受潮，粉末需干燥保存；
2．本制品储存液可用DMSO溶解，不推荐长期保存，甚至是-20oC。建议条件允许，最好现配现用。
3．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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