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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
38
- 英文名：
Vibrio choleraeO139
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海邦景
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
50T
产品名称：霍乱弧菌139型探针法荧光定量PCR试剂盒
英文：Vibrio choleraeO139
产品仅供科研使用分类：探针法荧光定量PCR
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。
需要自备的器材：
1．仪器：分析天平、离心机、荧光 PCR 扩增仪、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器（2 µL、20
µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：荧光 PCR 专用反应管、眼科剪、眼科镊、生理盐水、1.5 mL 经焦碳酸二乙酯（DEPC）水
处理的灭菌离心管、吸头（10 µL、200 µL、1000 µL）、灭菌双蒸水。
特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板，操作简单，定量准确快速。
2. 引物经过优化，特异性强。预期的 PCR 产物长度为 560 bp。
3. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
4. 提供阳性对照，便于分析试验结果。
PCR实验外包服务：
PCR起源：荧光定量PCR（也称TaqMan PCR,以下简称FQ-PCR）是美国PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术，该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针来实现其定量功能的，与变通PCR相比，FQ-PCR具有许多优点。与普通PCR相比，FQ-PCR具有许多优点：1、封闭反应，无需PCR后处理。2、特异性强，灵敏度高。3、采用对数期分析，摒弃终点数据，定量准确。4、定量范围宽，可达到10个数量级。5、仪器在线式实时检测，结果直观，避免人为判断。6、可实现一管双检或多检。7、操作安全，缩短时间，提高效率。荧光定量 PCR是 通过对 PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。
【结果分析条件设定】
u 基线（Baseline）设定：应选择该次实验指数扩增前所有样本荧光信号比较稳定的一段区域（所有样本荧光信号无较大波动），起始点（Start）应避开荧光采集起始阶段的信号波动，终止点（End）应比最早出现指数扩增的样本Ct值减少1~3个循环，建议基线设为6~15。
u 阈值(Threshold)设定：将阈值线设定在刚好超过正常阴性质控品扩增曲线的最高点。
【质控标准】
1. 阴性质控品的检测结果应为阴性，无指数扩增期，Ct=40或无Ct；
2. 阳性质控品的检测结果应为阳性，有明显的指数扩增期，Ct值应小于等于35；
3. 以上要求需在一次实验中同时满足，否则该次实验视为无效。
【结果判断】
1. 阳性：有明显的指数扩增期，且Ct＜38；
2.可疑：有明显的指数扩增期，且38≤Ct<40，此时样本为可疑样本；对于可疑样本建议复核一次，若复核结果Ct<40且有指数扩增期，则判定为阳性，否则判定为阴性；
3. 阴性：无指数扩增期，Ct=40或无Ct值均判定为阴性样本。
【对检验结果的解释】
1. 实验室环境污染、试剂污染、样品交叉污染会出现假阳性结果；
2. 试剂运输、保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，可能会导致出现假阴性结果。
霍乱弧菌139型探针法荧光定量PCR试剂盒具有下列特点：
1. 一站式，足够 50 次酶切-连接反应、50 次预扩反应和 1600 次 AFLP PCR（PCR 按 30 uL 体系计算），但不包括 DNA 纯化和带型分析试剂（如 PAGE 电泳试剂和 银染试剂）。
2. 本系列产品提供 EcoRI-MseI 组合，适用于 GC 含量在 50%以上的基因组。对 GC 含量在 50%以下的基因组，需从本公司采购 AFLP（EcoRI-TaqI）组合。
3. 各种参数都经过优化，一次 PCR 所得 AFLP 片段数一般在 10-100 之间，可重复 性好，误差小于 0.6%。4. 本产品适用于基因组在 500 Mb-6000 Mb 的材料（如动物和植物），对于基因组 在 50-500 Mb 的材料（如细菌和真菌）或 50Mb 以下的材料（如质粒，cosmid， BAC，YAC 和 PAC 等），需要分别另购专门的+1 型预扩引物混合液和+3 型 EcoRI 引物（8 种）AFLP 引物对。
注意事项：
①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
ULBP2 Others Human 人 ULBP2 / N2DL-2 人细胞裂解液 (阳性对照) 乙酸铵(分子生物学级)Ammonium acetate质量规格：>98%,分子生物学级
KG-1 人髓性红白血病细胞微晶纤维素(100 um)Cellulose, Microcrystalline质量规格：BR,100 um
HeLa 229人细胞 HeLa 229 human cervical cancer cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS乳糖；α-乳糖,一水alpha-Lactose, monohydrate质量规格：BR
HGF Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 HGF / Hepatocyte Growth Factor 蛋白氯化钙二水Calcium chloride, dihydrate质量规格：>99%,BR
小鼠周神经成纤维细胞(MPNF)(5×105) HL-60, 人早幼粒白血病细胞 Human乙二醇Ethylene glycol质量规格：BR
SPN Others Mouse 小鼠 SPN / CD43 人细胞裂解液 (阳性对照) 布地奈德-d8Budesonide-d8质量规格：美国进口
EJ 人膀胱癌细胞6α-羟基布地奈德6α-Hydroxy Budesonide质量规格：美国进口
SW1116人结肠腺癌细胞 SW1116 human colon adenocarcinoma cells L-15培养基(GIBCO)+10%FBS6β-羟基布地奈德6β-Hydroxy Budesonide质量规格：美国进口
CD70 Protein Rat 重组大鼠 CD70 / CD27L / TNFSF7 蛋白 (Fc 标签)亚叶酸钙水合物Folinic acid calcium salt hydrate质量规格：美国进口
人脂肪细胞-内脏(HPA-v)(1×106 ) MDA-MB-231(ATCC来源), 人癌细胞 Human喜树碱钠盐Sodium Camptothecin质量规格：美国进口
小鼠胚胎成纤维细胞;MEF内消旋-四苯基卟吩(>92.0%(HPLC))质量规格：>92.0%(HPLC)meso-Tetraphenylchlorin
HAVCR1 Others Mouse 小鼠 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 人细胞裂解液 (阳性对照) 四苯基卟吩(不含氯)(>98.0%(HPLC))质量规格：>98.0%(HPLC)Tetraphenylporphyrin (Chlorin free)
真皮微血管内皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)2,4,6-三苯基-1,3,5-三嗪(>98.0%(GC))质量规格：>98.0%(GC)2,4,6-Triphenyl-1,3,5-triazine
RPS6KA2 Others Human 人 RSK3 / RPS6KA2 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 1,3-二苯基-1,3-丙二酮(>98.0%(GC))质量规格：>98.0%(GC)1,3-Diphenyl-1,3-propanedione
中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-HCV-NS5A三溴新戊醇质量规格：>97%Trisbromoneopentyl Alcohol
霍乱弧菌139型探针法荧光定量PCR试剂盒人成纤维细胞总RNAHLF NA本亚磺酸钠5毫克
CD79B Others Rat 大鼠 CD79B / B29 人细胞裂解液 (阳性对照) 2，3-二溴炳醇 2,3-Dibromo-1-propcnol 96-13-9
人椎间盘髓核细胞完全培养基 100mL十二醇25克
VERO C1008 (E6)细胞，非洲绿猴肾细胞 CHO/dhFr-(中国仓鼠二氢叶酸还原酶缺陷细胞) 小鼠T瘤细胞(鸡OVA基因修饰);E.G7-OVA抗生素Ⅲ号培养基25克
EFNB2 Protein Canine 重组狗 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 (His 标签)4298-52-62-乙炔2-Ethynylthiopxene
注意事项：
1．基础程序；
2．扩增温度和延伸温度；
3．反应时间；
4．循环次数；
5．PCR 反应液的配制；
6．PCR技术的基本原理；
7．PCR的反应动力学；
8．PCR扩增产物；
9．PCR反应体系与反应条件。
英文：Vibrio choleraeO139
产品仅供科研使用分类：探针法荧光定量PCR
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。
需要自备的器材：
1．仪器：分析天平、离心机、荧光 PCR 扩增仪、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器（2 µL、20
µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：荧光 PCR 专用反应管、眼科剪、眼科镊、生理盐水、1.5 mL 经焦碳酸二乙酯（DEPC）水
处理的灭菌离心管、吸头（10 µL、200 µL、1000 µL）、灭菌双蒸水。
特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板，操作简单，定量准确快速。
2. 引物经过优化，特异性强。预期的 PCR 产物长度为 560 bp。
3. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
4. 提供阳性对照，便于分析试验结果。
PCR实验外包服务：
PCR起源：荧光定量PCR（也称TaqMan PCR,以下简称FQ-PCR）是美国PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术，该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针来实现其定量功能的，与变通PCR相比，FQ-PCR具有许多优点。与普通PCR相比，FQ-PCR具有许多优点：1、封闭反应，无需PCR后处理。2、特异性强，灵敏度高。3、采用对数期分析，摒弃终点数据，定量准确。4、定量范围宽，可达到10个数量级。5、仪器在线式实时检测，结果直观，避免人为判断。6、可实现一管双检或多检。7、操作安全，缩短时间，提高效率。荧光定量 PCR是 通过对 PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。
【结果分析条件设定】
u 基线（Baseline）设定：应选择该次实验指数扩增前所有样本荧光信号比较稳定的一段区域（所有样本荧光信号无较大波动），起始点（Start）应避开荧光采集起始阶段的信号波动，终止点（End）应比最早出现指数扩增的样本Ct值减少1~3个循环，建议基线设为6~15。
u 阈值(Threshold)设定：将阈值线设定在刚好超过正常阴性质控品扩增曲线的最高点。
【质控标准】
1. 阴性质控品的检测结果应为阴性，无指数扩增期，Ct=40或无Ct；
2. 阳性质控品的检测结果应为阳性，有明显的指数扩增期，Ct值应小于等于35；
3. 以上要求需在一次实验中同时满足，否则该次实验视为无效。
【结果判断】
1. 阳性：有明显的指数扩增期，且Ct＜38；
2.可疑：有明显的指数扩增期，且38≤Ct<40，此时样本为可疑样本；对于可疑样本建议复核一次，若复核结果Ct<40且有指数扩增期，则判定为阳性，否则判定为阴性；
3. 阴性：无指数扩增期，Ct=40或无Ct值均判定为阴性样本。
【对检验结果的解释】
1. 实验室环境污染、试剂污染、样品交叉污染会出现假阳性结果；
2. 试剂运输、保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，可能会导致出现假阴性结果。
霍乱弧菌139型探针法荧光定量PCR试剂盒具有下列特点：
1. 一站式，足够 50 次酶切-连接反应、50 次预扩反应和 1600 次 AFLP PCR（PCR 按 30 uL 体系计算），但不包括 DNA 纯化和带型分析试剂（如 PAGE 电泳试剂和 银染试剂）。
2. 本系列产品提供 EcoRI-MseI 组合，适用于 GC 含量在 50%以上的基因组。对 GC 含量在 50%以下的基因组，需从本公司采购 AFLP（EcoRI-TaqI）组合。
3. 各种参数都经过优化，一次 PCR 所得 AFLP 片段数一般在 10-100 之间，可重复 性好，误差小于 0.6%。4. 本产品适用于基因组在 500 Mb-6000 Mb 的材料（如动物和植物），对于基因组 在 50-500 Mb 的材料（如细菌和真菌）或 50Mb 以下的材料（如质粒，cosmid， BAC，YAC 和 PAC 等），需要分别另购专门的+1 型预扩引物混合液和+3 型 EcoRI 引物（8 种）AFLP 引物对。
注意事项：
①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
ULBP2 Others Human 人 ULBP2 / N2DL-2 人细胞裂解液 (阳性对照) 乙酸铵(分子生物学级)Ammonium acetate质量规格：>98%,分子生物学级
KG-1 人髓性红白血病细胞微晶纤维素(100 um)Cellulose, Microcrystalline质量规格：BR,100 um
HeLa 229人细胞 HeLa 229 human cervical cancer cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS乳糖；α-乳糖,一水alpha-Lactose, monohydrate质量规格：BR
HGF Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 HGF / Hepatocyte Growth Factor 蛋白氯化钙二水Calcium chloride, dihydrate质量规格：>99%,BR
小鼠周神经成纤维细胞(MPNF)(5×105) HL-60, 人早幼粒白血病细胞 Human乙二醇Ethylene glycol质量规格：BR
SPN Others Mouse 小鼠 SPN / CD43 人细胞裂解液 (阳性对照) 布地奈德-d8Budesonide-d8质量规格：美国进口
EJ 人膀胱癌细胞6α-羟基布地奈德6α-Hydroxy Budesonide质量规格：美国进口
SW1116人结肠腺癌细胞 SW1116 human colon adenocarcinoma cells L-15培养基(GIBCO)+10%FBS6β-羟基布地奈德6β-Hydroxy Budesonide质量规格：美国进口
CD70 Protein Rat 重组大鼠 CD70 / CD27L / TNFSF7 蛋白 (Fc 标签)亚叶酸钙水合物Folinic acid calcium salt hydrate质量规格：美国进口
人脂肪细胞-内脏(HPA-v)(1×106 ) MDA-MB-231(ATCC来源), 人癌细胞 Human喜树碱钠盐Sodium Camptothecin质量规格：美国进口
小鼠胚胎成纤维细胞;MEF内消旋-四苯基卟吩(>92.0%(HPLC))质量规格：>92.0%(HPLC)meso-Tetraphenylchlorin
HAVCR1 Others Mouse 小鼠 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 人细胞裂解液 (阳性对照) 四苯基卟吩(不含氯)(>98.0%(HPLC))质量规格：>98.0%(HPLC)Tetraphenylporphyrin (Chlorin free)
真皮微血管内皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)2,4,6-三苯基-1,3,5-三嗪(>98.0%(GC))质量规格：>98.0%(GC)2,4,6-Triphenyl-1,3,5-triazine
RPS6KA2 Others Human 人 RSK3 / RPS6KA2 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 1,3-二苯基-1,3-丙二酮(>98.0%(GC))质量规格：>98.0%(GC)1,3-Diphenyl-1,3-propanedione
中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-HCV-NS5A三溴新戊醇质量规格：>97%Trisbromoneopentyl Alcohol
霍乱弧菌139型探针法荧光定量PCR试剂盒人成纤维细胞总RNAHLF NA本亚磺酸钠5毫克
CD79B Others Rat 大鼠 CD79B / B29 人细胞裂解液 (阳性对照) 2，3-二溴炳醇 2,3-Dibromo-1-propcnol 96-13-9
人椎间盘髓核细胞完全培养基 100mL十二醇25克
VERO C1008 (E6)细胞，非洲绿猴肾细胞 CHO/dhFr-(中国仓鼠二氢叶酸还原酶缺陷细胞) 小鼠T瘤细胞(鸡OVA基因修饰);E.G7-OVA抗生素Ⅲ号培养基25克
EFNB2 Protein Canine 重组狗 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 (His 标签)4298-52-62-乙炔2-Ethynylthiopxene
注意事项：
1．基础程序；
2．扩增温度和延伸温度；
3．反应时间；
4．循环次数；
5．PCR 反应液的配制；
6．PCR技术的基本原理；
7．PCR的反应动力学；
8．PCR扩增产物；
9．PCR反应体系与反应条件。
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文献和实验相关实验
1．分类 （1）血清分型 霍乱弧菌（V.cholerae）有不耐热的H抗原和耐热的O抗原。前者为共同抗原，特异性低，后者具有群特异性和型特异性，是霍乱弧菌分群和分型的基础。根据O抗原的不同，霍乱弧菌现有155个血清群，其中仅O1群和O139群引起霍乱。O139血清群是新出现的型别，与O1群抗血清无交叉反应，但可与O22和O155血清群产生交叉反应，遗传学特征和毒力基因与O1群相似。O2血清群～O138血清群可引起人类的胃肠炎，无明显的季节分布，不引起霍乱
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