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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
低温保存
- 英文名:
2×SYBR qPCR Mixture(染料法)
- 库存:
193
- 供应商:
上海机纯实业有限公司
- 规格:
5×1ml/1ml/10×1ml
| 规格: | 5×1ml | 产品价格: | ¥990.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 1ml | 产品价格: | ¥247.0 |
| 规格: | 10×1ml | 产品价格: | ¥1210.0 |
产品介绍:本品是用于染料法(SYBR Green I)实时荧光定量的预混体系。本品含有优化浓度的HotStart Taq DNA Polymerase、dNTPs、Mg2+、ROXII、反应缓冲液和稳定剂等成分。
用 途:主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后cDNA靶序列的检测,如基因表达分析,拷贝数分析,SNP基因型分析等,适用于不同类型荧光定量PCR。
使用方法:本品为2×预混实时荧光定量PCR反应体系,使用时只需加入模板、引物和水,使其工作浓度为1×,即可进行反应。
特 点:具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性等优点,可大限度地减少人为误差、节约PCR实验操作时间、降低污染几率。
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文献和实验几个复孔,选择重复性好的 CT 值参与计算。 (2)CT<30,重复性较差。这种情况一般同操作有关。 解决办法:从以下几个方面进行问题的排查:①加样准确度;②移液器吸取液体的准确度;③定期校准 qPCR 仪。 ①加样准确度 避免小体积加样,减少加样误差。可以将引物、SYBR Green Mix、ddH2O 配置成混合体系,并且增加模板的稀释梯度,大体积加样。如:原液 cDNA 添加 1μl,可以更改为原液 cDNA 稀释 5 倍,添加 5μl,使用 ddH2O 补齐体系至 20μl 即可
PCR产物的荧光值就可以。参比染料的作用是标准化荧光定量反应中的非PCR震荡,校正加样误差或者是孔与孔之间的误差,提供一个稳定的基线。现在很多公司已经把ROXTM配制在MasterMix或者Premixture里。如果反应曲线良好或已经优化好反应体系,也可以不加ROXTM染料校正。通常来讲,real-time qPCR的反应程序不需要像常规的PCR那样,要变性、退火、延伸3步。由于其产物长度在80-150bp 之间,所以只需要变性和退火就可以了。SYBR@Green等染料法,最好在PCR扩增程序结束
成功做完了逆转录,这时候可能有些疲累了。筛引物、做定量的时候要加样的孔也较多,即使使用了 qPCR 预混液,也有加错样的可能发生。诺唯赞的 ChamQTM SYBR® Color qPCR Master Mix 系列(Q411 /Q421 /Q431 /Q441)提供不同颜色的试剂,利用移液过程中的变色效应,追踪移液过程,可以极大的减少移液错误。 引物设计有原则 在使用 SYBR 染料法时,引物设计需遵循以下原则:引物长度 18~25bp,产物长度 80~300bp,GC 含量 40~60
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