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文献和实验/管胰酶、抗生素可分装为1mL/管。分装最好先于细胞操作第五,操作之前,培养液先放到37度的细胞培养箱里复温。原因:尽量减少对细胞的刺激。低温对于细胞也是一个刺激因素。第六,操作之前,大脑先过一遍此次操作所需要用到的所有用具。将所有用具先放到无菌台面上。减少拿入拿出的动作,保证无菌。(如果万一发现少拿了什么,也不要紧,再加上就是。如果是枪头盒、移液管等用具,最好先用消毒酒精喷一下)。第七,操作之前,带着的手套先喷消毒酒精。然后再进入工作台。等一分钟,等手套上的酒精挥发之后再进行操作。6、 细胞
实验材料 •BSA(1 mg/ml),0.05 g的BSA(Sigma-Aldrich Ltd.)溶于50ml ddH2O中,每Eppendorf管约加入1ml溶液,并在-20℃下冷冻。 •预染色marker (Bio-Rad) •ProMarker(Wealtec) •两套玻璃板与校正卡,厚玻璃板与U形玻璃板,0.75 mm厚胶条和一个0.75 mm 10齿梳(Wealtec) •浓度为12%的SDS-PAGE分离胶(0.75 mm);2.31 ml ddH
的 Matrigel 在 4°C 下过夜解冻,在 6 孔板的每孔滴加 1ml 冷的 Matrigel,旋动 6 孔板使 Matrigel 溶液分布均匀。随后转移至 37℃ 条件下孵育 10min 使其凝固,使用前需室温静置 1h。 2、将 hPSCs 接种在包被 Matrigel 的 6 孔板中,每孔加入 3ml mTeSR1,放置在 37℃,5%CO2 的培养箱中,培养至细胞汇合度约为 75-85%、且大部分无分化的状态时,吸出培养基。 3、向 hPSCs 中加入1ml Dispase(1mg/ml),并将培养
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