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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
大量
- 英文名:
Collagenase, Type III, powder
- 保质期:
切勿冻存,有效期24个月
- 供应商:
上海泽叶生物科技有限公司
- 保存条件:
长时间储存于4℃
- 规格:
1G
产品介绍
本公司胶原酶来源于进口原料,酶活性高,纯度高。本品为固体粉末状态。
胶原酶III 可用于人体肿瘤、小鼠肾脏、成人/胎儿大脑、肺和许多其他组织的分解。也可用于肝和肾灌注研究、胰腺消化、大鼠非实质性肝细胞分离和肝细胞制备。
外观为黑棕色粉末。
最适PH为6.3-8.8。
活性: 2-10 FALGPA units/mg solid, ≥250 CDU/mg solid (CDU = collagen digestion units)
胶原酶能够特异性结合-R-Pro-8-X-Gly-Pro-R-序列中的中性氨基酸(X) 和甘氨酸之间的肽键。该粗品是溶组织梭菌分泌的混合酶。
主要为胶原酶、中性蛋白酶和梭菌蛋白 酶。其中梭菌蛋白酶是被氧化的、最不活泼的酶,组织的分离必须依靠胶原酶和中性蛋白酶两者共 同作用。
使用说明:
胶原酶III可以用 TESCA buffer (50 mM TES,0.36 mM 氯化钙,pH 7.4,37°C)配制成 1-2 mg/ml。
也可以用含钙镁的 PBS、含钙镁的 hanks 或不含血清的培养基配制。(配完后分装,避免反复冻融)。
活性说明:
1 个胶原消化单位(CDU):在 pH 7.4,37℃以及钙离子存在的条件下,以每5小时从胶原中 释放的多肽相当于茚三酮显色1微摩尔亮氨酸量为一个活性单位。
1FALGPA 单位:在 pH 7.5、25℃以及钙离子存在的条件下,一个 FALGPA 水解单位每分钟 可水解 1.0μmol 呋喃基丙烯酰基-Leu-Gly-Pro-Ala。 激活剂:Ca2+,最适合浓度为5 mM。
底物:不同类型的胶原是其天然底物,而一些合成的多肽也可以作为其底物,比如: N-CBZ-gly-pro-gly-gly-pro-ala (Km = 0.71 mM)、N-CBZ-gly-pro-leu-gly-pro、N-(3-(2-furyl)acryloyl)- leu-gly-pro-ala(FALGPA)、4-Phenylazo benzyloxycarbonyl-pro-leu-gly-pro-D-arg、N-2,4-Dinitrophenyl- pro-gln-gly-ile-ala-gly-gln-D-arg。除此之外N-Succinyl-gly-pro-leu-glypro7-amido-4-methylcoumarin是 类胶原酶的肽酶的底物。N-(2,4-Dinitrophenyl)-proleu-gly-leu-trp-ala-D-arg 氨基酸化合物是脊椎动物 胶原酶的底物。
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文献和实验突变和化学修饰的耐受性,认为siRNA的5’端相对于3’端具有对突变的较高耐受性。有学者认为正义链3’突出端的任何碱基修饰对siRNA作用效果均无明显影响。还有学者认为与反义链互补的正义链3’端发生1—4个碱基的错配反而有助于增强RNAI的活性。二、siRNA制备方法目前为止较为常用的5种制备siRNAs的方法包括化学合成体外转录长片断dsRNAs经RNase III 类降解 (e.g. Dicer, E. coli, RNase III)siRNA表达载体或者病毒载体在细胞中表达siRNAsPCR制备
1.实验动物 产蛋期母鸡(动物实验中心购买),普通饲料喂养,自由进食进饮;实验前禁食12h 2.主要试剂及仪器 EDTA-2Na购自国药集团化学试剂有限公司;双抗购自Hyclone公司;M199培养基、胎牛血清及Ⅱ型胶原酶均购自美国Gibico 公司;CO2恒温培养箱购自美国Thermo公司 3.实验步骤 A. 翅下静脉注射2mL EDTA-2Na(W/V,2%)溶液处死母鸡,新洁尔灭消毒液浸泡消毒5min,打开腹腔,剪取整个卵巢,小心剥离卵泡(以8-15g为最佳),置于装有PBS
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