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- 2025年08月04日
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- 技术资料
ISOPLANT
DNA快速提取试剂(植物/酶/細菌)
ISOPLANT是一种可以迅速地从植物・酶・细菌提取DNA的试剂盒。
利用其主要成分氯.化苄，破坏细胞壁、细胞膜及核膜，在表面活性剂的作用下，使其溶解，尤其是植物样品，无需捣碎即可提取DNA。此试剂盒便于处理多个样品。从双子叶植物及单子叶植物提取DNA时，无需进行预处理。提取到的DNA可用于PCR及限制性内切酶反应。
◆特点
• 迅速地从植物・酶・细菌提取基因组DNA
• 无需使用臼等工具捣碎材料，便于处理多个样品
• 从双子叶植物及单子叶植物提取DNA时，无需进行预处理
◆产品列表
保存方法
冷藏保存（2～10°C）
若长时间不使用RNase A，请冷冻保存（-20°C）。除了RNase A ，其他可以室温保存。
| ISOPLANT （20次、100次） |
|||
| 组成 |
容量（20次） |
容量（100次） |
备注 |
| Solution I Extraction Buffer |
6 ml x 1 |
30 ml x 1 |
可能析出白色沉淀，但不影响品质。请进行37°C左右的水浴，待结晶完全溶解后即可放心使用。 |
| Solution II Lysis Buffer |
3 ml x 1 |
15 ml x 1 |
主要成分是氯.化苄。氯.化苄为危险品，请小心使用。 |
| Solution III Sodium Acetate |
3 ml x 1 |
15 ml x 1 |
- |
| TE（pH8.0） |
2 ml x 1 |
10 ml x 1 |
10 mMTris-HCl（pH8.0）, 1 mM EDTA |
| RNase A（1mg/ml） |
20 µl x 1 |
100 µl x 1 |
若长时间不使用RNase A，请冷冻保存（-20°C）。 |
◆使用实例
操作步骤
* 若材料为植物，0.01 ～ 0.1 g材料用剪刀剪取得到3-5mm小块。根据植物种类，体积有所不同。添加Solution II时，使材料完全浸泡于下层溶液（Solution II）。此外，尽量使用新鲜材料。冻结保存试剂过长会导致回收率下降。若材料为酶、细菌，使用1.5 ml culture离心后得到的沉淀（～ 0.03 g）。
实验数据
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文献和实验近年来，ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9等基因组编辑技术可谓是层出不穷，尤其是CRISPR/Cas9，一出现便在全球范围内掀起一股热潮。同时，各大公司也开发出一系列相应的产品，其中一种至关重要的就是基因敲除阳性克隆筛选的试剂。 目前用的比较多的有CEL I酶，CEL I是植物来源的一种特异性识别碱基错配的酶，活性高，不会产生假阳性。而且CEL I酶是目前生物界发现的唯一能准确切割异源双链DNA中存在错配位点的酶，在遗传学研究和应用领域中扮演重要的角色，多应用在临床诊断领域
液。(2 )2×SDS -PAGE 凝胶电泳加样缓冲液：100 mmol / L Tris-HCI (pH 8 .0 )100 mmol / L DTT4 %SDS0.2 % 溴酚蓝20 % 甘油三、实验方案1、外源基因的诱导表达(1 ）用适当的限制性内切核酸酶消化载体DNA 和目的基因。(2 ）按连接步骤连接目的基因和载体，并转化到相应的宿主菌。(3 ）筛选出含重组子的转化菌落，提取质粒DNA 作限制性内切核酸酶图谱，DNA 序列测定，确定无误后进行下一步。(4 ）如果表达载体的原核启动子为PL 启动
; 赵双宜等, 2002) 。棉花组织中富含多糖、多酚等次生代谢物质, 在提取过程中, 多糖易与分子植物育种,2004 年,第2 卷,第1 期,第147 —150 页Molecular Plant Breeding ,2004 ,Vol12 ,No11 ,147 —150 RNA 共沉淀, 多酚类物质极易被氧化成红褐色物质, 然后与核酸不可逆的结合, 对RNA 的提取造成干扰。RNA 极易受到RNA 酶的影响而降解以及受到蛋白质、DNA 等的污染而降低RNA 的质量(Woodhead et al
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