ISOPLANT II DNA快速提取试剂(植物/酵母/細菌

ISOPLANT II

DNA快速提取试剂(植物/酵母/細菌)

 

　 　ISOPLANT II是可以迅速地从植物・酵母・细菌提取DNA的试剂盒。与旧产品ISOPLANT一样，
利用Solution II的主要成分氯.化苄，对细胞壁进行破坏，在表面活性剂的作用下，使其溶解。植物
组织的多糖及多酚比植物组织多，提取时常混入DNA中。这些物质抑制限制 性内切酶反应及PCR，
难以对DNA进行定量测定。改良后的新产品ISOPLANT II，可有效去除多糖及多酚等抑制物质。不
仅可以从草本植物提取，还可以从难度较大的木本植物提取，提取到的DNA可用于PCR及限制性内切酶反应。

 

◆特点

 

　　•　迅速地从植物・酵母・细菌提取基因组DNA

　　•　无需使用臼等工具捣碎材料，便于处理多个样品

　　•　经改良，可有效去除抑制物质（多糖及多酚）

 

◆产品列表

 

保存方法

　　冷蔵保存（2～10°C）

　　若长时间不使用RNase A ，请冷冻保存（-20°C）。除了RNase A ，其他产品可以室温保存。

 

 

ISOPLANT II （20回分、100回分）
产品	容量（20次）	容量（100次）	备注
Wash Buffer	20 ml x 1	100 ml x 1
Solution I	6 ml x 1	30 ml x 1	可能析出白色沉淀，但不影响品质。请进行37°C左右的水浴，待结晶完全溶解后即可放心使用。
Solution II	3 ml x 1	15 ml x 1	主要成分是氯.化苄。氯.化苄为危险品，请小心使用。
Solution III-A	2 ml x 1	10 ml x 1	Solution III-A为白色悬浊液，蒸发后只剩下白色固相，请使用灭菌蒸馏水溶解。
Solution III-B	2.5 ml x 1	12 ml x 1
TE（pH8.0）	2 ml x 1	10 ml x 1	10 mM Tris-HCl（pH8.0）, 1 mM   EDTA
RNase A        （1 mg/ml）	20 µl x 1	100 µl x 1	若长时间不使用RNase A ，请冷冻保存（-20°C）。

 

 

◆使用实例

 

操作流程

 

 

植物	酵母、细菌

 

 

实验数据

 

 

 

1. 使用从植物叶子提取的DNA进行RAPD分析

2. 使用从植物叶子提取的DNA进行制限性内切酶反应

3. 从细菌、酶提取得DNA进行制限性内切酶反应

4. ISOPLANT II与旧产品（ISOPLANT）的纯度比较

 

 

Data 1: 使用从植物叶子提取的DNA进行RAPD分析

 

　　分别使用各样品0.1g冻结粉碎的叶子的1/100提取到的DNA，进行RAPD分析。

 

 

RAPD-PC
PCR Mixture			PCR条件
Template DNA	1 µl		95°C	3 min.	1 cycle
10×Gene Taq Universal Buffer	5 µl		40°C	5 min.
dNTP Mixture (2.5 mM each)	4 µl		72°C	1 min.
Arbitrary Primer(AP-A-2 primer) (10 µM)	1 µl
Gene Taq (5   units/µl)	0.25 µl		95°C	15 sec.	25 cycles
H2O	38.75 µl		40°C	2 min.
Total Volume	50 µl		72°C	1 min.
			72°C	5 min.

 

 

结果

 

	lane 1. 西瓜 lane 2. 黄瓜 lane 3. 南瓜 lane 4. 玉米 lane 5. 水稻 lane 6. 葱 lane 7. 豆子 lane 8. 烟草	lane 9. 菠菜 lane 10. 银杏 lane 11. 苹果 lane 12. 牡蛎 lane 13. 桃 lane 14. 柚子 lane 15. 梅干 lane 16. 梨
	M : Marker 4 (φX174/Hae III)

　Arbitrary Primer: AP-A-2(TGGATTGGTC)

　Taq DNA polymerase: Gene Taq

　3% Agarose 21

 

 

Data 2: 使用从植物叶子提取的DNA进行制限性内切酶反应

 

　　分别使用各样品0.1g冻结粉碎的叶子的1/20提取到的DNA，进行制限性内切酶反应(5～20 units)。

 

	lane 1. 烟草 lane 2. 菠菜 lane 3. 胡萝卜 lane 4. 梨 lane 5. 水稻 lane 6. 茶 lane 7. 柚子 lane 8. 苹果
	M : Marker 2 (λ/Hind III・EcoR I) a : intact DNA b : Hind III digest + RNase A

　　　　　　　0.8% Agarose S 

　　•注意事项　提取DNA时进行NaBH4处理，获得上述数据。

 

 

 

Data 3: 从细菌、酵母提取的DNA进行制限性内切酶反应

 

　　分别取1/20从1.5ml培养液体提取到的DNA，进行制限性内切酶反应(5～20 units)。

 

	lane 1. 粘质沙雷氏菌　Serratia marcescens lane 2. 牛莫拉氏杆菌　Moraxella bovis lane 3. 流感嗜血杆菌C 　Haemophilus influenzae c lane 4. 普通变形杆菌　Proteus vulgaris lane 5. 裂殖酵母　Shizosaccharomyces pombe lane 6. 毕赤酵母　Pichia pastoris lane 7. 酿酒酵母　Sacaomyces cerevisiae
	M : Marker 2 (λ/Hind III・EcoR I) a : intact DNA b : Hind III digest + RNase A

　　　　　　　0.8% Agarose S 

 

 

 

Data 4: ISOPLANT II与旧产品（ISOPLANT）的纯度比较

 

　　使用相同的样本量，分别用ISOPLANT II及旧产品（ISOPLANT）从菠菜及苹果叶子提取DNA，
检测吸光度（200～300 nm）

 

菠菜	苹果

　　

　　使用ISOPLANT II提取DNA，在260nm有峰值。表明DNA不含多糖及多酚等夹杂物，纯度较高。