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文献和实验,其中含有环状质粒DNA,并只加两种限制酶中的第二种。当预实验中的所有DNA都转变为线状(由凝胶电泳确定)时,通过凝胶电泳或尺坟排阻凝胶层析纯化质粒DNA大片段。\par 2)图1.7所示的是检查消化反应完全程度的一种更为严格的方法。对用第一个限制酶切割的一小份DNA进行末端标记,经离尽柱层析法纯化后,与未标记的线状DNA混合。然后用第二个酶消化,完全消化可使DNA小片段释放,它应带有50%的放射性活度,这可通过层析或通过凝胶电泳和放射自显影加以检测。 2。带有相同末端(平端或粘端)的片段
相关专题 【实验原理】 琼脂 糖凝胶电泳与醋酸纤维素薄膜电泳原理基本相同,但兼有分子筛效应,从而使不同分子量大小的DNA片段分离。琼脂糖是从琼脂中提取出来的含有较多的酸根和羟基多糖。回收DNA的方法很多,主要包括DEAE纤维素纸插片电泳法、透析袋电泳洗脱法、槽沟电泳洗脱法、v形槽电泳洗脱法以及低熔点琼脂糖凝胶挖块回收法。本实验采用琼脂糖凝胶DNA片段纯化试剂盒,此试剂盒采用独特的凝胶融解系统,结合DNA制备膜技术,具有高效、快速、方便
材料。选取长度为125 bp~5 148 bp范围内的12条片段进行研究。取1 μg DNA长度标记λ-DNA/ECoRⅠ+ HindⅢ,与1 μl上样缓冲液混匀后进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(电泳时间16 h,每厘米电压8~10 V,电泳缓冲液0.5×TBE)、银染色后采用凝胶专用分析软件Phoretix 1D standard 3.0分析,得到各标准DNA片段的迁移距离,共100例样本。 二、结果与分析 迁移距离与片段长度间的关系
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