少量PCR产物DNA纯化试剂盒（5μg)

特别提示：包括少量PCR产物DNA纯化试剂盒（5μg)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：少量PCR产物DNA纯化试剂盒（5μg)
英文名称：Mini DNA purification kits for PCR products
产品货号：WH0045
产品规格：50次

本试剂盒使用独特的离心吸附柱高效、专一地与DNA片段结合，同时最大限度除去蛋白质、离子及引物小片段等杂质。除了可用于PCR产物回收，对于一些酶反应液回收（酶切、连接、探针标记等）也同样适用。可回收100 bp-20 kb DNA片段，回收率可高达80%以上（＜ 100bp或＞ 10 kb的DNA片段，回收率为30%-50%）。得到的DNA可直接用于连接、转化、酶切、测序、杂交等分子生物学实验。

产品特点：
·速度最快：15min完成DNA回收，可同时处理多个样品，节省时间。
·步骤最少：操作简单，几次离心即可完成。
·效率最高：独特的离心柱和精心配制的缓冲液保证每次最大量回收到纯度极高的目的DNA。
·处理量：每个离心吸附柱每次最多可吸附的DNA量为5μg。

试剂盒组成：

组分	50T
平衡液BL	30ml
结合液PB	30ml
漂洗液PW	15ml
洗脱缓冲液EB	15ml
吸附柱CB1	50个
收集管（2ml）	50个

保存条件：室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10 min，以溶解沉淀。

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1．本试剂盒适用于无选择性的回收溶液中所有DNA片段，如需选择性回收特定片段，同时去除其他不同大小片段，请选择胶回收试剂盒。
2．洗脱缓冲液加量应根据回收前DNA量来决定：如回收前DNA只有1-5μg左右，则应选用少量型离心柱，加20-50μl洗脱缓冲液；如回收前有5-20 μg左右DNA，则应选用普通型离心柱，加30-100 μl洗脱缓冲液；如回收前有20-30 μg左右DNA，则应选用大量型离心柱，加50-300 μl洗脱缓冲液。
3．回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越少，回收率越低。
4．对于<100 bp和>10 kb的DNA片段可以适当的增加吸附和洗脱的时间。
5．平衡液BL的加入能够改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和稳定性，消除高温/潮湿或其他不良环境因素对吸附柱造成的影响。使用前请先检查平衡液BL是否出现浑浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。
6．用平衡液处理过的柱子最好当天使用，放置时间过长会影响效果。

使用方法：
使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1．柱平衡步骤：向吸附柱CB1中（吸附柱放入收集管中）加入500 μl的平衡液BL，12000rpm（~13400×g)离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子）
2．估计PCR反应液或酶切反应液的体积，向其中加入5倍体积的结合液PB，充分混匀（无需去除石蜡油或矿物油）。
  注意：如PCR反应体系为50μl（不包括石蜡油体积）,则加入250μl结合液PB。
3．将上一步所得溶液加入一个吸附柱CB1中（吸附柱放入收集管中），室温放置2 min，12000rpm（~13400×g)离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB1放入收集管中。
  注意：吸附柱容积为800 μl，若样品体积大于800 μl可分批加入。
4．向吸附柱CB1中加入600 μl漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm（~13400×g)离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB1放入收集管中。
  注意：如果纯化的DNA是用于盐敏感的实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议PW加入后静置2-5 min再离心。
5．重复操作步骤4。
6．12000rpm（~13400×g)离心2 min，尽量除去漂洗液。将吸附柱置于室温放置数分钟，彻底地晾干，以防止残留的漂洗液影响下一步的实验。
  注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验
7．取出吸附柱CB1，放入一个干净的离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加20-50μl洗脱缓冲液EB，室温放置2 min。12,000rpm（~13400×g)离心2 min，收集DNA溶液。
  注意：洗脱液的体积不应少于20 μl，体积过少会影响回收的效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率也有很大影响。若后续做测序，需使用去离子水做洗脱液，并保证其pH值在7.0-8.5范围内（可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。DNA也可以用缓冲液（10mM Tris-Cl,pH8.0)洗脱。为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中，再次离心。

DNA浓度及纯度检测：
1．回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
2．DNA应在OD₂₆₀处有显著吸收峰，OD₂₆₀值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40μg/ml单链DNA。
3．OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

我公司销售的少量PCR产物DNA纯化试剂盒（5μg)，少量DNA产物纯化试剂盒质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。