- 询价
- 上海研生
- HE62977-R
- 进口、国产
- 2025年07月15日
企业认证
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
60
- 英文名：
转基因构建PAT基因-35S终止子探针法qPCR试剂盒
- CAS号：
详见说明书
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
50T
转基因构建PAT基因-35S终止子探针法qPCR试剂盒 是从土壤农杆菌 CP4 菌株中分离得到的抗除草剂草甘膦基因，是转 基因植物研究中最为常用的一种筛选标记基因，因此本公司根据探针法 qPCR 原理开发 了专门用于检测 转基因构建PAT基因-35S终止子探针法qPCR试剂盒 的试剂盒，它具有下列特点： 1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。 2. 根据 转基因构建PAT基因-35S终止子探针法qPCR试剂盒 保守区域设计引物和探针，能专一性地检测出样品中的 转基因构建PAT基因-35S终止子探针法qPCR试剂盒 成分，但不能检测其他非 转基因构建PAT基因-35S终止子探针法qPCR试剂盒 成分。 3. 提供阳性对照，便于区分阴性样品。 4. 一管式闭管操作，降低了交叉污染。 5. 快速，整个检测过程（按一个样品计）所需时间仅为 2.0 小时。 6. 本只能用于科研，足够 50 次 20uL 体系的探针法荧光定量 PCR。
产品名称：转基因构建PAT基因-35S终止子探针法qPCR试剂盒说明书
运输：低温
保存：负20度
有效期：一年
货期：2-3周
使用方法：
一、转基因构建PAT基因-35S终止子探针法qPCR试剂盒说明书稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置 qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲
线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于PCR 阳性对照（用第一步稀释得到的标准曲线系列稀释液的第 4 号做模板）。下面只以定量分析为例描述操作骤。
数据处理 ：
11. 产品仅限科研如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵
轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的
log 值，再推算出其浓度。
12. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于或等
于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于
30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小于或等于 35 则为
阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。重复实验的 Ct 值如果大于或等于 40 则
为阴性，如果小于 40，则为阳性。
以下是公司正在促销打折产品：
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特点优势：
1. 特异性：所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
2. 重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3. 灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4. 实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5. 优势1：序列资源丰富，除公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性
6. 优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果产品仅限科研
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文献和实验源序列，这些序列通常不存在于野生型植物中。其中，这两个外源的DNA序列与花椰菜花叶病毒的35S启动子和根癌农杆菌的NOS终止子整合在一起。假如这两个序列的任一个被扩增出来，则表明外源基因已经转化入植物基因组中。原则上所有已批准的转基因农作物都是用含有这两个元件或其中任一个的构建载体转化的。对于一些在转基因构建载体中新使用的启动子和终止子序列的检测，逐渐成为科学家们关注的焦点。目前，已经设计了一些针对不同大小产物的引物对。表1为合成的引物序列，选择退火位点生成单一DNA片段，以便于结果的分析。PCR反应
），样本上样量不超过提取试剂盒说明书规定的上限，一般提取的 RNA 质量都是很好的。 ③除此之外，提取的过程中戴一次性干净手套；在单独洁净的区域操作；戴口罩并在操作过程中避免讲话。可有效防止实验者汗液、唾液中的 RNase 污染。 （2）该基因第一次扩增，其 CT 值偏大，而其余基因的 CT 值正常。 这种情况下就需要判定是因为基因的扩增效率低导致的 CT 值偏大，还是基因本身的表达量低造成的 CT 值偏大。 如何判定是因为基因的扩增效率低导致的 CT 值偏大，还是基因本身的表达量低造成的 CT
这两个条件我们才可以选择快速反应模式。而 Standard Mode 和 Fast Mode 的主要区别在于不同模式下仪器升降温速率不同，快速模式下升降温速度更快。下图列举了当前部分用于基因表达和基因分型的 Master Mix 所支持的反应模式，供大家参考（图 4）。另外针对当前使用较为广泛的体外诊断试剂盒，如新冠检测试剂盒，大家在运行模式选择时需要根据试剂盒说明书做相应的设置，保证实验设置与试剂盒说明书一致。 图 4 常见基因表达和基因分型 master mix 支持反应模式整理
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