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重组胰蛋白酶（RTrypsin）
◆概述
胰蛋白酶（Trypsin; EC 3.4.21.4）是一种丝氨酸蛋白酶，酶解赖氨酸及精氨酸C末端形成的肽键。重组猪胰蛋白酶是由毕赤酵母重组表达并采用层析色谱法纯化获得。氨基酸序列与猪胰腺来源的阳离子型胰蛋白酶完全一致，分子量为24 kDa，最适pH为7.0-9.0。可替代猪胰腺来源胰蛋白酶应用于各种生物技术过程中，如：重组胰岛素生产；细胞培养、细胞发酵；蛋白质的酶解、测序；各种组织的细胞分离等。活性受丝氨酸蛋白酶抑制剂如TLCK、PMSF等的抑制，金属离子螯合剂如EDTA等抑制酶活。
◆优势
● 批量生产规模大，批间小
● 高纯度，高比活性
● 重组表达生产，无外源性病毒污染，生产过程不使用动物来源原料
◆纯度
SDS-PAGE显示纯度＞95%。
◆来源
重组毕赤酵母菌株，其克隆有来自猪的胰腺来源阳离子型胰蛋白酶基因。
◆使用方法
保存：10 mmol/L HCl，20 mmol/L CaCl2；溶解后分装-15 ℃以下保存。
酶切体系：25 mmol/L Tris-HCl , pH 7.6~8.0。
推荐使用量：蛋白酶：融合蛋白质量比1：20~1：100（肽图或蛋白组学研究），
推荐使用量：1：200~1：2000（多肽/蛋白生产工艺）。
◆保存条件
储存稳定性：冻干粉存于-15 ℃以下，24个月稳定；10 mmol/L HCl，20 mmol/L CaCl2溶解后分装储存于
储存稳定性：-15 ℃以下，反复冻融5次，未能观察到活性损失；溶解后2~8 ℃保存建议不超过7 d。
运输稳定性：冰袋保温运输，活性稳定
◆应用实例
RTrypsin特异性酶切合成短肽
合成多肽序列YGKRLWK,理论酶切位点酶切产物YGKR、LWK、YGK、R、RLWK，蛋白酶：合成多肽质量比1：100，37 ℃酶切反应10 min，LC-MS验证酶切反应特异性。
| Peak# |
R.T. |
M.W. |
Sequence |
| Peak 1 |
6.70 min |
366.42 |
YGK |
| Peak 2 |
7.61 min |
552.6 |
YGKR |
| Peak 3 |
17.67 min |
445.56 |
LWK |
| Peak 4 |
19.53 min |
601.75 |
RLWK |
| Peak 5 |
19.97 min |
950.15 |
YGKRLWK |
◆产品信息
| 产品编号 |
产品名称 |
规格 |
比活 |
| RTrypsin |
10 mg |
3800 USP/mg |
|
| RTrypsin |
1 mg |
3800 USP/mg |
|
| RTrypsin |
10 μg |
3800 USP/mg |
◆相关产品
| 产品编号 |
产品名称 |
规格 |
储存温度 |
其他信息 |
| RTrypsin ELISA Kit |
96 孔 |
2～8 ℃ |
检测范围 |
|
| immobilized Recombinant Trypsin |
1.0 mL |
-15 ℃以下 |
1.0 mL含1.0 mg |
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文献和实验样品：重组胰蛋白酶，比活 4500USP u/mg pro.，上海雅心生物技术有限公司，纯度如图 1 所示。BAEE，Sigma. 图 1. 重组胰蛋白酶的纯度的 SDS-PAGE 鉴定 1. 最适 pH 的研究 准备 pH 为 3~12 的底物 BAEE（0.25 mM），分别测定 rPT 纯酶液的活性，最后结果表示为测定数值占最高酶活的百分比。缓冲液成分依次为 25 mM NaAc-HAc (pH 3~6)，25 mM Tris-HCl (pH 7~8)，25
样品：重组胰蛋白酶，比活 4000USP u/mg pro.，上海雅心生物技术有限公司，纯度如图 1 所示。BAEE，Sigma. 图 1. 重组胰蛋白酶的纯度的 SDS-PAGE 鉴定 1. 最适温度的研究 将底物 BAEE（0.25 mM）分别置于 4℃、15℃、20℃、25℃、30℃、40℃、50℃、60℃ 和 70℃ 水浴中温浴 20 min，加入相同体积的 RPT 酶液测定 rPT 的活力，结果表示为测定数值占最高酶活的百分比。 2. 温度稳定性的研究 取
用蛋白或多肽标签融合于重组蛋白中，进而方便重组蛋白的纯化和检验。小分子标签通常免疫原性较低，且不影响目标蛋白功能而得以保留。但是大分子标签如 GST 因其对目标蛋白的结构和生物活性有所影响，通常需要去除。 今天我们就来聊一聊柱上酶切那点事儿~ 什么是柱上酶切 柱上酶切纯化路线是指在吸附了标签蛋白的层析柱上添加蛋白酶进行在位去除标签，具有更加灵活、高效、快速的特点。 相比于常规的洗脱后的酶切纯化路线，柱上酶切不仅可以简化酶切后的再次上样操作，同时可以尽量避免操作过程中目标
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