重组胰蛋白酶溶液

重组胰蛋白酶最适 PH 和 PH 稳定性

样品：重组胰蛋白酶，比活 4500USP u/mg pro.，上海雅心生物技术有限公司，纯度如图 1 所示。BAEE，Sigma. 图 1. 重组胰蛋白酶的纯度的 SDS-PAGE 鉴定 1. 最适 pH 的研究 准备 pH 为 3~12 的底物 BAEE（0.25 mM），分别测定 rPT 纯酶液的活性，最后结果表示为测定数值占最高酶活的百分比。缓冲液成分依次为 25 mM NaAc-HAc (pH 3~6)，25 mM Tris-HCl (pH 7~8)，25

重组胰蛋白酶最适温度和温度稳定性

4、底物溶液（2.5 mmol/L）：精密称取 N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯（BAEE）（Sigma）42.8 mg，加入相应 50 ml 体积的测活缓冲液，使其溶解，即为 2.5 mmol/L 的底物母液，现配现用, 使用时，用测活缓冲液 10 倍稀释。 5、供试品：精密称取待测样品适量。平行分装 3 支，置于蓝冰保温运输箱内，室温下放置。 实验方法： 1、重组胰蛋白酶运输条件下的稳定性：样品测定活性，作为初始活性。蓝冰于-20℃ 充分预冷后，取出，与样品同时放入泡沫保温运输

胰蛋白酶的提取

蛋白沉淀出来。经硫酸铵分级盐析将胰蛋白酶原、胰凝乳蛋白酶原和弹性蛋白酶原沉淀。沉淀物经水溶解并调至pH8.0，用极少量的胰蛋白酶将胰蛋白酶原激活，同时溶液中的胰凝乳蛋白酶原和弹性蛋白酶原也被激活，三种酶原相互作用过程如下： 也可采用从胰脏中提取出胰蛋白酶原，利用合适的提取溶液的pH值促使胰蛋白酶原部分自溶，并通过溶液中Ca2+的环境，使胰蛋白酶原被开始自溶的少量具有活性的胰蛋白酶所激活，转变为具有活性的胰蛋白酶（胰凝乳蛋白酶原及弹性蛋白酶原亦同时被胰蛋白酶激活成有活性的酶