重组双碱性氨基酸内肽酶（RKex2）

重组双碱性氨基酸内肽酶（RKex2）

 

 

◆概述

 

Kex-2（E.C.3.4.21.61）属于枯草杆菌蛋白酶家族，为酵母自身编码的一种前体加工酶，Ca²⁺ 依赖型丝氨酸蛋白酶，能够专一性地识别和切割Lys-Arg，Arg-Arg，Pro-Arg等双碱性氨基酸^※ 的羧基端肽键。不同于Trypsin，该酶不能识别和切割单一碱性氨基酸（Arg或Lys）的羧基端肽键。常在酵母表达外源蛋白前体中加入Kex-2识别位点，便于外源蛋白前体加工。该酶最适pH为9.0，在偏酸性环境中稳定，稳定pH为5.0-6.0。最适温度为37 ℃，酶活性不受常规丝氨酸蛋白酶抑制剂（如PMSF、TPCK等）抑制。

 

※碱性氨基酸：水解生成的氢氧根负离子多于氢正离子的氨基酸，其特点是侧链常含有可质子化的碱性化学基团。包括以下三种：

 

中文名	英文名	缩写	符号	等电点
精氨酸	Arginine	Arg	R	10.76
赖氨酸	Lysine	Lys	K	9.74
组氨酸	Histidine	His	H	7.59

 

 

◆优势

 

●　单批次产量大，批间差小

●　高纯度，高比活性

●　无外源性病毒污染，无动物源生产原料

 

 

◆纯度

 

SDS-PAGE显示纯度>90%。

 

 

◆使用方法

 

溶解缓冲：20 mmol/L NaAc-HAc，2 mmol/L Ca²⁺，pH 5.0~5.5。

酶切体系：50~100 mmol/L Tris，2 mmol/L Ca²⁺，pH 7.0~9.0；或HEPES，5 mmol/L  Ca²⁺，pH 7.0~9.0；

推荐使用量：蛋白酶：融合蛋白质量比1：20~1：1000

 

 

◆保存条件

 

储存稳定性：冻干粉存于-15 ℃以下，24个月稳定；20 mmol/L NaAc-HAc，2 mmol/L Ca²⁺，

储存稳定性：pH 5.0~5.5溶解后分装储存于-15 ℃以下，避免反复冻融；溶解后2~8 ℃保存建议不超过24 h。

运输稳定性：冰袋保温运输，活性稳定。

 

 

◆应用实例

 

RKex-2特异性酶切合成短肽

合成多肽序列YGKRLWK,理论酶切位点酶切产物YGKR及LWK，蛋白酶：合成多肽质量比1：1000，37 ℃酶切反应10 min，LC-MS验证酶切反应特异性。

 

 

Peak#	R.T.	M.W.	Sequence
Peak 1	2.79 min	522.6	YGKR
Peak 2	6.26 min	445.56	LWK
Peak 3	6.94 min	950.15	YGKRLWK

 

 

 

◆产品信息

 

产品编号	产品名称	规格	比活
RKex20202	RKex2	10 mg	10 U/mg
RKex20204	RKex2	10 μg	10 U/mg

 

 

◆相关产品

 

产品编号	产品名称	规格	储存温度	检测范围
MDRK0201	RKex2 ELISA Kit 重组双碱性内肽酶检测试剂盒	96 孔	2～8 ℃	1.0～4000 ng/mL