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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
江西江蓝纯生物试剂有限公司
- 库存:
27
- 适应物种:
人/动物/植物
- 应用:
仅供科研研究使用
- 检测方法:
ELISA法
- 规格:
48T/96T
| 规格: | 48T | 产品价格: | ¥1580.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 96T | 产品价格: | ¥1980.0 |
牛磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶酶联免疫试剂盒标本的处理:
1)细胞培养上清液
根据需要用试剂盒中的标准稀释液稀释样品,然后按照说明书所述方法检测。推荐稀释浓度是稀释5倍。
2)脑脊液
根据需要用试剂盒中的标准稀释液稀释样品,然后按照说明书所述方法检测。推荐稀释浓度是5倍。
3)血浆
① 用离心收集在真空血液收集管中的血液,5,000×g,15分钟,4℃,分离血浆样品,然后储存在零下80℃直到使用。
② 用试剂盒中的标准稀释液5倍稀释血浆以避免血浆中的干扰物质影响检测,按照说明书指定方法检测。
完整的牛磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶酶联免疫试剂盒包含以下各组分:免疫吸附剂、物和酶的底物
1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂)
2)酶符号的抗原或抗体(物)
3)酶的底物
4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考规范品和操控血清(定量测定中)
5)物及标本的稀释液
6)洗刷液
7)酶反响停止液
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文献和实验为广泛存在于真核细胞中的 Ca2 受体蛋白质(参见钙结合蛋白)。分子量 1.7万,具有与肌肉的肌钙蛋白 C相似的氨基酸顺序,对热稳定,等电点为 4.0, 1分子可与 4分子的 Ca2 结合,其解离常数约为 10-6 M。曾被发现作为环腺苷磷酸二酯酶的活化蛋白(垣内史朗等, 1970)。后来发现腺苷酸环化酶、磷酸化酶 b激酶、红细胞膜 Ca2 、 Mg2 - ATP酶、 NAD激酶、肌球蛋白 L链激酶等酶,都可在 Ca2 的存在下被其活化。关于活化的机制,认为
信号途径可表示为: 激素→ G蛋白耦联受体→G蛋白→腺苷酸环化酶→cAMP→依赖cAMP的蛋白激酶A→基因调控蛋白磷酸化→基因转录。 不同细胞对cAMP信号途径的反应速度不同: 在肌肉细胞,1秒钟内可启动糖原降解为葡糖1-磷酸,而抑制糖原合成。 在某些分泌细胞,需要几个小时, 激活的PKA 进入细胞核,将CRE结合蛋白磷酸化,调节相关基因的表达。CRE(cAMP response element )是DNA上的调节区域。 Gi调节模型 ①通过α亚基与腺苷酸环化酶结合,直接
/go/WesternBlotProtocol。 酶联免疫吸附分析(ELISA) ELISA已逐渐成为测定蛋白磷酸化的一种有力方法。ELISA的定量能力优于Western blot,且在调节激酶活性和功能的研究中表现出巨大的作用。这种微孔板形式的分析一般利用目的蛋白特异的捕获抗体,与磷酸化状态无关。随后让目的蛋白结合在抗体包被的分析板中,目的蛋白可以是纯的,也可以是复杂的异质样品(如细胞裂解液)中的一个组分。加入待分析的磷酸化位点特异的检测抗体。这些分析通常设计为显色或荧光检测。产生的信号强度与最初样品中存在的磷酸化
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