TALENs或 ZFN等方法进行了基因编辑的区域),经退火、延伸步骤后,形成异源双链 DNA。在扩增子池中经过多轮循环后,基因插入和缺失(Indels)等造成的突变得到富集。第二步,将退火后的 PCR 产物用 EnGen T7 核酸内切酶 I 进行切割。 EnGen T7 核酸内切酶 I 是一种结构特异性酶,可有效识别大于1个碱基的基因错配。当错配出现时,DNA 分子的两条链被切割从而形成较小的片段。分析片段图谱可以对基因编辑实验的效率进行评估。
EnGen 基因编辑突变检测试剂盒包含一组对照模板和引物预混液,可用作 PCR 反应及 T7 核酸内切酶 I 消化实验的对照。对照模板和引物预混液中含有 2 种对照质粒和 1 对对照引物。经 PCR 扩增、变性、退火后,部分会形成含有10个碱基的插入突变,此种异源双链 DNA 正是 T7 核酸内切酶 I 的底物,600 bp 的 DNA 会被切割成 200 bp 和 400 bp 的两个片段;而同源双链 DNA 则不被 T7 核酸内切酶 I 切割。通过琼脂糖凝胶电泳或片段分析设备可以非常方便的分辨出同源(野生型)和异源(突变)片段。