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- 文献和实验
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110
- 规格:
100g
检测指标更直接
L-Glutamine L-谷氨酰胺与传统的检测线粒体膜电位方法相比,能够更直接地检测线粒体通透性转换孔开放程度的变化;
荧光探针毒性更低
由于C2012 Calcein AM (钙黄绿素AM)的毒性特别低,并且不会抑制细胞的增殖、趋化性等绝大部分功能,所以与其它同类产品如CFDA SE等相比是更适合染活细胞的荧光探针;
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兼容性好
后续还可进行其他非绿色荧光染色,例如采用Annexin V-PE细胞凋亡检测试剂盒(C1065)或细胞凋亡与坏死检测试剂盒(C1056)检测细胞凋亡、Mito-Tracker Red CMXRos (C1049)检测线粒体活力、Hoechst 33342活细胞染色液(C1027/C1028/C1029)染色细胞核等。
图1. 线粒体通透性转换孔(MPTP)检测试剂盒原理图。荧光探针钙黄绿素乙酰甲酯(Calcein AM)通过被动运输进入活细胞后被酯酶(Esterase)催化生成钙黄绿素(Calcein),整个细胞都呈现很强的绿色荧光;含Co2+)处理后,呈现绿色荧光的Calcein结合钴离子生成没有荧光的Calcein-2Co,但正常情况下线粒体的MPTP没有打开,从而钴离子不能进入线粒体,因此此时仅线粒体中呈现绿色荧光;如果采用阳性对照钙离子载体(Ionomycin)处理后,钙离子大量进入细胞内和线粒体基质,导致MPTP打开,使部分Calcein从线粒体内释放,和胞浆中的钴离子结合而失去荧光。同时钴离子进入线粒体内从而使线粒体内呈现绿色荧光的Calcein也生成了没有荧光的Calcein-2Co。如果有样品可以诱导MPTP的部分或全部打开,就会导致线粒体中的绿色荧光减弱甚至消失。这样就可以根据线粒体中Calcein绿色荧光的强弱来判断线粒体MPTP开放的程度,绿色荧光越强,开放程度越低,绿色荧光越弱开放程度越高。
图2. 使用线粒体通透性转换孔(MPTP)检测试剂盒检测MPTP开放的效果图。Calcein AM (1X)与L-929细胞进行孵育,细胞质包括线粒体发出强绿色荧光(A);细胞进一步与CoCl2 (1X)孵育以后,细胞质内Calcein的绿色荧光被CoCl2淬灭,仅留下线粒体内的绿色荧光(B);使用Ionomycin (1X)处理细胞,诱导细胞外的Ca2+大量进入细胞内,过多的Ca2+进入线粒体基质,导致MPTP的开放,使部分Calcein从线粒体内释放,同时使钴离子进入线粒体内并导致Calcein的绿色荧光淬灭(C);使用解耦联剂CCCP和FCCP (5μM)处理细胞,虽然线粒体膜电位丢失,但短时间内不会直接引起MPTP的开放,因此线粒体内绿色荧光强度无明显变化(D、E)。
L-Glutamine L-谷氨酰胺注意事项:
荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
Calcein AM在潮湿环境中容易分解,并避免反复冻融,收到产品后建议分装并-20℃密封保存。
由于Calcein AM在PBS等水溶液中不稳定,配制成工作液后需尽快使用。
培养液中的血清和酚红对Calcein AM的染色有一定的影响,建议在加入Calcein AM工作液前充分洗涤细胞。
Calcein AM标记的细胞,荧光均匀,而且对短期细胞迁移示踪效果非常好,但荧光的持续时间与细胞类型、培养条件等因素相关,一般在几小时之内,而且有时也会被某些类型细胞迅速外排。如果需要长时间标记细胞,请使用CFDA SE (C1031)等荧光探针。
L-Glutamine L-谷氨酰胺仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。8-Azaguanine 8-氮杂鸟嘌呤L-Glutamine L-谷氨酰胺
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文献和实验1. L-谷氨酰胺(L-Glutamine)在细胞培养中重要吗?它在溶液中不稳定吗? 是细胞生长的必须氨基酸,为培养的细胞提供重要的能量来源。脱掉氨基后,L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解,降解率随保存温度而变。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成,而氨对于一些细胞具有毒性。 2. GlutaMAX-I是什么?培养细胞如何利用GlutaMAX-I?这个二肽有多稳定? GlutaMAX-I 即谷丙氨酸二肽
年,来自 Jackson Laboratory 的 C.Ostermeier 等人对脱脂牛奶 / 棉子糖冷冻小鼠精子方法的修改,方法是在 CPA(3%脱脂奶和 18%棉子糖组合)中添加单硫代甘油(MTG),这种方法能让 C57BL/6J 品系受精率提高到 60%。近交系 B6 冷冻的方案得到了质的提升,也能满足冷冻需求。 2010 年,Takeo 和 Nakagata 又改良了冷冻方案,即在原来的组合基础上添加了 L-谷氨酰胺,L-谷氨酰胺是血浆和组织中含量最丰富的游离氨基酸,L-谷氨酰胺具有
性,一般与激素或其它物质起相互协同或加成作用。另一种常见的添加物就是血清替代物,目前已有许多可完全或部分替代传统培养液中血清成分的商业产品,其稳定性较好,但批次间仍有差别,产品的成分也不很确定。2、细胞培养基配制 2.1 干粉培养基原倍液的配制 1)配制过滤除菌的细胞培养基 1)阅读培养基使用说明,确定需要添加何种添加剂(如NaHCO3、L-谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等)。 2)根据所需将培养基全部倒入一容器中,用少量注射用水(20℃~30℃)将袋内残留培养基洗下,并入容器。加注射用水至总体
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