- ¥845
- 康朗生物/KALANG
- KL1061R
- 中国
- 2025年07月16日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
细胞/细菌总RNA提取试剂盒
- 保质期：
室温保存
- 供应商：
上海康朗生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃避光保存
- 规格：
50次
细胞/细菌总RNA提取试剂盒
产品组分
| 货号 |
KL1061（50次） |
| 溶液RD |
30 ml |
| 溶液RB |
50 ml |
| 溶液RP |
30 ml |
| 溶液RW |
12 ml |
| TE |
8 ml |
| DEPC处理水 |
10 ml |
| 溶菌酶（50 mg/ml） |
500 μl |
| RNase-free 纯化柱 |
50个 |
| RNase-free 离心管 |
50个 |
| 说明书 |
1份 |
需要自备的溶液
● β-巯基乙醇
● 无水乙醇
产品说明
细胞/细菌总RNA提取试剂盒是经过改进开发的新一代产品，提高了裂解液的裂解能力和提取的灵敏度，通过在特定适宜的条件下特异、可逆地结合RNA，彻底去除各种蛋白质和其他杂质，从而使得到的RNA纯度更好，质量更高。该试剂盒可从各种培养细胞或菌体中快速提取总RNA，每个吸附柱每次可处理50–100 mg组织或5×106 细胞，可同时处理大量不同的样品，一个小时内即可完成反应。提取的总RNA没有DNA和蛋白的污染，可用于Real-time RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、polyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆等。
保存条件
溶菌酶和DEPC处理水-20℃保存，溶液RD、溶液RB和溶液RP 4℃保存，其他溶液和纯化柱室温保存。
注意事项
● 操作前在溶液RD中加入β-巯基乙醇至终浓度为1%，如1 ml溶液RD中加入10 μl β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的溶液RD 4℃可放置一个月，溶液RD在储存时可能会形成沉淀，如果有沉淀出现，请加热溶解后使用。
● 第一次使用前应在溶液RW中加入无水乙醇，加入量为溶液RW：无水乙醇=1：4，即每12 ml溶液RW需要加入48 ml无水乙醇。
● 严防操作环境、使用的容器、耗材和试剂的RNase污染。操作过程中勤换手套。
● 使用本产品提取的RNA一般不含有DNA污染。在极少数情况下（与组织pH值等相关），如果有DNA污染而又必须去除，则可以用RNase-free的DNase处理样品。
● 请严格遵照操作步骤进行操作。
● 不同起始材料用量及预期RNA产率。
| 细胞种类 |
细胞最大用量 |
最大用量时RNA得率 |
| COS |
3×106 |
35 μg |
| Hela |
7×106 |
15 μg |
| NIH/3T3 |
1×107 |
10 μg |
操作步骤
操作前在溶液RD中加入β-巯基乙醇至终浓度为1%。
第一次使用前应在溶液RW中加入无水乙醇，加入量请参考瓶上标签。
1. 收集细胞/菌体
● 悬浮细胞的收集（收集细胞数量请不要超过1×107）：估计细胞数量，300×g离心5 min，将细胞收集到离心管中，仔细吸除所有培养基上清。
● 单层贴壁细胞的收集（收集细胞数量请不要超过1×107）：可直接在培养容器中裂解（容器直径不超过10 cm），或者使用胰蛋白酶处理后离心收集细胞沉淀。
● 菌体的收集（收集菌体数最大不超过1×109）：4℃ 12,000 rpm离心2 min收集菌体，仔细去除所有培养基上清，用含有溶菌酶的100 μl TE彻底重悬菌体，孵育时间见下表。
| 细菌种类 |
TE缓冲液中溶菌酶的浓度 |
孵育时间（室温） |
| G-细菌 |
400 μg/ml |
3-5 min |
| G+细菌 |
3 mg/ml |
5-10 min |
以下的所有离心步骤均在室温（20-25℃）进行。
2. 加入350 μl溶液RD（在使用前请加入β-巯基乙醇），涡旋振荡混匀，若出现不溶性沉淀，12000 rpm离心2 min，将上清转移至另一离心管中。
3. 加入700 μl溶液RB，混匀（此时可能会出现沉淀）。将得到的溶液和沉淀一起转入纯化柱（纯化柱+收集管）中，12,000 rpm离心30-60 s，倒掉废液，将纯化柱放回收集管中。
4. 向纯化柱中加入350 μl溶液RP，12,000 rpm离心30-60 s，弃废液，将纯化柱放回收集管中。
5. 向纯化柱中加入500 μl溶液RW（使用前请先检查是否已按1:4加入无水乙醇，即含80%乙醇），室温静置2 min，12,000 rpm离心30 s，弃废液，将纯化柱放回收集管中。
6. 重复上步操作。
7. 将纯化柱放回收集管中，12,000 rpm继续空离2 min，去除残余液体，将纯化柱置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
● 此步骤目的是将纯化柱中残余的漂洗液去除，离心后将纯化柱在室温放置片刻，或置于超净工作台上通风片刻，以充分晾干。如果有漂洗液残留，可能会影响后续的RT等实验操作。
8. 将纯化柱转入一个新的1.5 ml离心管（RNase-free）中，加30–100 μl RNase-free ddH2O（DEPC处理水），室温放置2 min，12,000 rpm离心2 min。
● 洗脱缓冲液体积不应少于30 μl，体积过小影响回收效率。且RNA应保存在-70℃，以防降解。
● 如果想提高RNA得率，可重复上步操作一次，合并两次得到的溶液。
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文献和实验细胞/细菌总 RNA 提取试剂盒操作指南（DP430） ——细菌
以下操作按照天根产品 DP430 细胞/细菌总 RNA 提取试剂盒的说明书进行，所有反应现象仅适用于该产品及本文所标明的样本量。如使用其它操作流程或产品，样本量不同可能现象与本文有所差异。实验准备：1. 细菌培养液，溶菌酶（RT401，客户自备，提取细菌总RNA时需配备。）2. 无水乙醇 ，β-巯基乙醇3. 一次性无菌注射器（DNase I配置），移液器及配套RNase-Free无菌枪头（200 μl ，1ml）1.5 ml，2.0ml 离心管（RNase-free）4. 通风橱 涡旋
本文针对艾德莱生物RNA提取产品选择指南（仅供参考）首先询问客户提取的大致种类，是动物组织细胞？植物？血液样品？真菌？细菌？病毒？酵母？不同的种类应该选择不同的产品。动物组织细胞(1) RN01 TRIpure reagent,这个就是Invitrogen的TRIzol，我们质量完全和进口一样可以100%替代进口TRIzol。(2) RN04 总RNA提取试剂盒。这款就是TRIzol，只是把TRIzol配套使用的氯仿，异丙醇，70%乙醇，DEPC处理的水和配全了。等于
） 40、QuickSpin Versatile Total RNA Mini Kit 人或动物组织、培养细胞、细菌及酵母总RNA提取试剂盒 41、QuickSpin Plant Total RNA Mini Kit（植物及丝状真菌总RNA小量提取试剂盒） 42、OligoLink mRNA Capture Kit（mRNA富集或提取试剂盒） 43、NovaScience Total RNA isolation Reagent（NovaScience 总RNA提取试剂） 44、Nova
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